李哲丽
- 作品数：50 被引量：30H指数：3
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 基于CRISPR/Cas9系统构建Uox基因敲除的高尿酸血症小鼠模型
- 2025年
- 目的 通过CRISPR/Cas9技术构建Uox基因敲除且能稳定遗传的小鼠品系,并评价其是否能够模拟高尿酸血症患者的疾病特点。方法 在Uox基因Exon 2~4的前后两侧设计双sgRNA,将基因敲除所需的sgRNA与Cas9 mRNA按照一定比例显微注射进小鼠的受精卵中,培养2~4 h后,将胚胎移植至代孕母鼠体内并最终获得F0代小鼠。对F0代小鼠进行PCR鉴定与测序分析,筛选适合的Uox基因阳性敲除小鼠与野生型(wide type, WT)小鼠合笼获得F1代,再挑选F1代中杂合子(基因型为Uox^(+/-))雌鼠与雄鼠合笼得到纯合的F2代小鼠(基因型为Uox^(-/-))。最后检测Uox^(-/-)小鼠与WT小鼠血清尿酸、尿液尿酸,血清中肌酐、尿素、丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶的含量并进行对比,通过苏木素-伊红(HE)染色结合Masson染色观察肾和肝组织的病理变化。结果 与WT小鼠相比,Uox^(-/-)小鼠血清尿酸(雄鼠:(478.4±114.6)μmol/L,P<0.001;雌鼠:(507.7±129.6)μmol/L,P<0.001)、尿液尿酸(雄鼠:(4116.8±1928.1)μmol/L,P<0.001;雌鼠:(2998.0±547.7)μmol/L,P<0.01)、血清中肌酐((91.8±55.6)μmol/L,P<0.001)、尿素((28.6±13.9) mmol/L,P<0.05)、丙氨酸氨基转移酶((53.3±23.3) U/L,P<0.01)及门冬氨酸氨基转移酶((203.3±70.3) U/L,P<0.001)水平均显著升高。组织病理学的结果显示,Uox^(-/-)小鼠的肝中可见中量肝细胞变性,肾中可见中重度的肾小管囊性扩张、变性和纤维化,肾小球肥大增生,小血管扩张充血,间质单核及淋巴细胞浸润。结论 通过CRISPR/Cas9技术成功构建了Uox基因Exon 2敲除的小鼠纯合品系,可以作为高尿酸领域相关研究的动物模型。
- 张艺薇龙维虎唐东红范胜涛王鹏王陈芸李哲丽黄璋琼叶尤松
- 关键词：高尿酸血症动物模型基因敲除尿酸氧化酶
- 2013年昆明地区实验用小鼠及豚鼠寄生虫及病毒感染情况调查被引量：2
- 2015年
- 目的分别调查昆明市三家单位提供的共90只实验用ICR小鼠和45只实验用豚鼠的体内、外寄生虫感染情况,以及小鼠及豚鼠仙台病毒(Se V)、小鼠肝炎病毒(MHV)、豚鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎(LCMV)的感染情况,为实验动物质量管理提供一定的参考依据。方法根据现行国家标准所描述的方法及病毒检测试剂盒说明书的说明,对昆明市三家单位随机提供的共90只ICR小鼠和45只豚鼠样本,分别进行体内、外寄生虫、小鼠MHV及小鼠Se V、豚鼠LCMV及豚鼠Se V的检测。结果昆明地区实验用小鼠及实验用豚鼠均检出体内、外寄生虫;3只小鼠检测出体外寄生虫,检出率为3.3%;20只小鼠检测出体内寄生虫卵,检出率为22.2%;4只豚鼠检测出体外寄生虫,检出率为8.9%;9只豚鼠检测出体内寄生虫卵,检出率为20.0%;小鼠MHV及Se V血清学检测无阳性;豚鼠LCMV、Se V血清学检测无阳性。结论实验动物质量监测是实验动物质量控制的有效手段,对医学及生命科学的研究至关重要,昆明地区实验动物的寄生虫质量控制有待加强。
- 叶尤松李哲丽念昕李太斌唐东红
- 关键词：实验动物小鼠寄生虫病毒
- 建立B超引导的获取新鲜组织样品的非人灵长类动物猕猴肝脏及肾脏活体穿刺的方法
- 目的建立安全有效的B超引导下的猕猴活体穿刺以获取新鲜肝脏、肾脏样品的方法。方法 4只猕猴,雄性,8-12kg,10-12岁,动物经氯胺酮肌肉注射进行麻醉,麻醉后将其保定于手术台,侧仰卧位,于腹肋间区域、侧腰部肋缘下腹部区...
- 李哲丽叶尤松王陈芸陈倩杨浩杨忠邱炳玲肖涵唐东红
- 关键词：猕猴肝脏肾脏B超
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- RT-qPCR检测猕猴ABCG2基因转录水平的方法
- 本发明提供一种RT‑qPCR检测猕猴ABCG2基因转录水平的方法，以猕猴新鲜肾脏组织提取的总RNA逆转录合成得到的cDNA为模板，利用PCR引物组合进行实时荧光定量PCR扩增，获得ABCG2基因片段及内参基因GAPDH片...
- 唐东红王陈芸叶尤松李哲丽马开利鲁帅尧杨浩陈倩肖涵邱炳玲杨忠
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- 一种急性高尿酸血症树鼩模型的构建方法
- 本发明涉及一种急性高尿酸血症树鼩模型的构建方法，属于模型构建技术领域。该方法是将肌苷腹腔注射至树鼩，注射量为300mg/kg～400mg/kg，即获得急性高尿酸血症树鼩模型，本发明首次利用肌苷对医学生物研究中与人类遗传关...
- 唐东红叶尤松王陈芸李哲丽肖涵邱炳玲陈倩杨浩杨忠马开利鲁帅尧黄璋琼
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- 检测树鼩LCN2基因转录水平的引物、试剂盒及方法
- 本发明涉及一种检测树鼩LCN2基因转录水平的引物、试剂盒及方法，属于分子生物技术领域。检测树鼩LCN2基因转录水平的引物包括树鼩LCN2基因表达水平的特异性上、下游引物和作为内参基因的树鼩GAPDH基因的特异性上、下游引...
- 王陈芸唐东红叶尤松李哲丽李涛徐瑾董鑫张铭娟黄明峰
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- 树鼩黄嘌呤氧化脱氢酶XDH/XO cDNA全长序列及应用
- 本发明涉及树鼩黄嘌呤氧化脱氢酶XDH/XO cDNA全长序列及应用，属于分子生物技术领域。通过以近源物种人类及猕猴的XDH/XO基因的CDS序列保守区设计多对引物，通过RT‑PCR反转录及扩增，结合RACE技术获得树鼩X...
- 唐东红王陈芸叶尤松李哲丽马开利鲁帅尧易红昆
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- RT-qPCR检测猕猴SLC22A12/URAT1基因转录水平的方法
- 本发明提供一种RT‑qPCR检测猕猴<I>SLC22A12</I>/URAT1基因转录水平的方法。以猕猴新鲜肾脏组织提取总RNA逆转录合成得到的猕猴肾脏组织cDNA为模板，利用PCR引物组合进行实时荧光定量PCR扩增，获...
- 唐东红叶尤松王陈芸李哲丽邱炳玲肖涵陈倩杨浩杨忠马开利鲁帅尧
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- 豚鼠饲养繁殖及实验用的组合笼具
- 本实用新型提供一种豚鼠饲养繁殖及实验用的组合笼具，包括饲养笼架、饲养笼盒、倒置于饲养笼盒盒体外边缘的饮水瓶和盒体内的食斗，所述饲养笼架为四层，每层分为三格，每格放置一个饲养笼盒，所述饲养笼盒有栅栏形底面，饲养笼盒下方有一...
- 唐东红许长兴叶尤松王陈芸杨永生李晔范梅花彭加林潘渝宏李哲丽
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- 荧光定量PCR与半定量PCR检测猕猴不同器官组织中黄嘌呤脱氢酶/氧化酶基因的mRNA表达差异的比较被引量：4
- 2015年
- 目的比较荧光定量PCR与半定量PCR检测猕猴体内肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中黄嘌呤脱氢酶氧化酶(XDH/XO)的mRNA的相对表达量的差异,为改进实验研究方法学提供参考依据。方法提取健康猕猴新鲜肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中总RNA,使用相同的引物序列及内参基因,分别用荧光定量PCR与半定量PCR进行相对定量检测,结果做比对分析。结果两种检测方法均能检测到健康猕猴新鲜肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中XDH/XO的mRNA表达,荧光定量PCR灵敏度可检测到肝脏组织0.4ng总RNA中的XDH/XO的mRNA表达,半定量PCR灵敏度可检测到肝脏组织15.625 ng总RNA中的XDH/XO的mRNA表达,荧光定量PCR较半定量灵敏度高39倍。两种方法检测结果均显示猕猴不同组织XDH/XO的mRNA表达在肝脏组织中表达水平最高,对于表达量较低的其他组织,荧光定量PCR与半定量PCR检测结果存在有一定差异。结论两种方法均可用于检测猕猴体内肝脏组织、上皮组织、睾丸组织、心肌组织,肾脏组织中黄嘌呤氧化脱氢酶(XDH/XO)的mRNA的相对表达量,荧光实时定量PCR灵敏度较高于半定量PCR法。
- 唐东红叶尤松李哲丽彭波李桂珍李润萍杨光蕊
- 关键词：荧光定量PCRMRNA表达猕猴
