张文峰 作品数:35 被引量:57 H指数:3 供职机构: 广东药科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广东省自然科学基金 广东省科技计划工业攻关项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 文化科学 更多>>
两种存活蛋白变异剪接体在HeLa细胞中的表达定位及相互作用 被引量:3 2009年 存活蛋白(survivin)是重要的肿瘤相关抗原基因,在肿瘤的发生发展中起着重要的作用.除了标准的剪接形式外,它至少还编码2种变异剪接产物—存活蛋白-2B和存活蛋白-ΔEx3,这2个变异剪接体所编码的蛋白具有不同的生物学功能.为研究这2个变异剪接体在肿瘤细胞中的相互作用情况,本实验利用增强型青色荧光蛋白(enhanced cyan fluorescent protein,ECFP)和增强型黄色荧光蛋白(enhanced yellowfluorescent protein,EYFP)分别标记存活蛋白-2B和存活蛋白-ΔEx3.首先通过激光共聚焦扫描显微镜观察它们的细胞定位;同时利用荧光共振能量转移(fluorescence resonanceenergytransfer,FRET)技术研究两者在细胞内的相互作用情况.研究结果表明,存活蛋白-2B主要分布在细胞质中,而存活蛋白-ΔEx3则主要分布在细胞核内,少量分布在细胞质中;FRET分析结果显示,两者仅在细胞质中存在着很弱的相互作用,表明两者很可能是通过某种间接的方式发挥功能上的相互调节作用.本研究为进一步探讨存活蛋白变异剪接体的生物学功能及相互作用机制奠定了基础. 邵红伟 张文峰 胡青莲 黄树林关键词:荧光共振能量转移 相互作用 基于pHrodo分析腺病毒诱导胞内体裂解的方法 本发明公开一种基于pHrodo分析腺病毒诱导胞内体裂解的方法,属于生命科学领域。本发明的通过将腺病毒与荧光染料pHrodo同时加入细胞,荧光染料pHrodo随病毒胞吞进入细胞并达到胞内体,在胞内体的酸性环境中可被激发出荧... 张文峰 邵红伟 李柱明 曾子绯 谢欣文献传递 核转染技术转染人外周血淋巴细胞效率的初步研究 被引量:1 2012年 目的探索核转染技术转染人外周血淋巴细胞的转染效率。方法利用核转染方法将携带增强型绿色荧光蛋白基因的质粒转染人外周血淋巴细胞,24小时后经流式细胞仪检测绿色荧光蛋白EGFP表达水平,确定转染效率。结果未经任何刺激的外周血淋巴细胞转染效率为8.7%,经抗CD3抗体OKT3和抗CD28抗体共同刺激后的外周血淋巴细胞转染效率为10.5%,经抗CD3抗体OKT3和IL-2共同刺激后的外周血淋巴细胞转染效率为9.9%。结论核转染方法是一种转染人外周血淋巴细胞的有效方法,转染前细胞是否受到刺激激活,对转染的效率影响不大。 张文峰 邵红伟 区裕升 黄树林关键词:外周血淋巴细胞 转染效率 5型腺病毒载体对人T淋巴细胞的转染及细胞毒性分析 被引量:2 2014年 目的:利用5型腺病毒载体转染人T淋巴细胞,对其转染T淋巴细胞的效率以及细胞毒性进行分析。方法:选取T淋巴瘤Jurkat细胞及原代T细胞,腺病毒按感染复数(multiplicity of infection,MOI)为20、50、100、200和400对其转染,转染48 h后利用流式细胞术检测转染效率;选取腺病毒转染后的不同时点,利用碘化丙啶染色法分析转染对于细胞周期的影响;利用Annexin V/7-AAD染色法分析转染诱导细胞凋亡情况;利用台盼蓝染色计数法分析转染对活细胞数目的影响。结果:5型腺病毒载体转染T淋巴瘤的效率最高,转染效率随着MOI值的增大而增加;CD8+T细胞和CD4+T细胞的转染效率大致相同,T细胞经刺激活化后,CD8+T细胞的转染效率下降;病毒转染未导致明显细胞凋亡;病毒转染对细胞周期与活细胞数目没有显著影响。结论:5型腺病毒载体转染T细胞呈现较低细胞毒性。 张文峰 张琼宇 邵红伟 吴凤麟 王腾 黄树林关键词:腺病毒载体 T淋巴细胞 细胞毒性 Na^+/K^+ATPase介导甘草诱导低钾血症的研究 被引量:1 2019年 目的探讨高剂量甘草水提物导致小鼠低钾血症的分子机制。方法利用高剂量甘草水提物(7.5 g/kg)灌胃制备低钾血症小鼠模型,收集小鼠尿液和粪便,检测其K^+浓度;分析小鼠肠道组织的转录组数据,寻找与钾代谢相关基因的表达变化,并利用real-time PCR进行确认;针对显著改变的关键基因进行干预,确认其与甘草诱导低钾血症的关系。结果高剂量甘草水提物可造成小鼠低钾血症,转录组结果表明Na^+/K^+ATPase的表达水平发生显著变化,real-time PCR结果也确证了这一点,肠道病理切片显示肠道通透性发生改变;低钾血症小鼠的尿钾降低,而粪便中K^+浓度增多,表明甘草水提物诱导的低钾血症可能主要由肠道失钾造成;给予Na^+/K^+ATPase抑制剂处理后,尿液中K^+浓度快速升高,粪便中的K^+浓度降低;继续予以高剂量甘草水提物处理,在Na^+/K^+ATPase抑制剂药效消除后小鼠尿液和粪便中K^+浓度又恢复至造模状态。结论高剂量甘草水提物造成的低钾血症主要是由胃肠道失钾造成的,而这种低钾血症可以通过Na^+/K^+ATPase抑制剂特异性地进行逆转。 张亚倩 徐鹏程 张琴 徐榕 张文峰 沈晗 陶嫦立 邵红伟关键词:甘草 低钾血症 肝癌特异性TCRVβ亚家族基因的药效研究 黄树林 肖兰凤 邵红伟 陈启助 吴凤麟 沈晗 薄华本 王金全 张文峰 张帆 罗利琼 林月霞 该项目在前期通过基因优势取用分离到特异性识别杀伤肝癌细胞的TCRVβ基因的基础上,以荷肝癌SCID小鼠为模型,重点研究了TCRVβ基因转染人PBMC后的抗肝癌药效学作用,结果发现特异性TCRVβ基因转染的PBMC在肿瘤局...关键词:关键词:肝癌 恶性肿瘤治疗 着眼于研究生培养实际需要的《分子生物学》课程教学新探索 被引量:2 2014年 研究生培养与本科生的最大不同是研究生要开展科学研究工作,因此对其各种课程教学有新的要求,分子生物学作为生物医药专业的基础性课程,其研究生教学具有代表性。本文从生物医药专业研究生的培养需求出发,探讨了对分子生物学课程教学的一些新的探索和尝试,目的是以点带面,以课程教学促进研究生专业能力的培养,对研究生后续开展的课题设计和实验研究起到有益的促进作用。 沈晗 孟民杰 邵红伟 张文峰 黄树林关键词:研究生培养 分子生物学 人IL-12重组逆转录病毒载体在HeLa细胞中的表达 2010年 目的:包装携带人白细胞介素12(IL-12)的逆转录病毒,用于宫颈癌的治疗研究。方法:携带IL-12的逆转录病毒重组质粒pL35P40SN经PA317细胞包装,G418筛选,在NIH3T3细胞进行病毒滴度测定。然后用病毒感染人宫颈癌细胞HeLa。PCR、RT-PCR方法检测IL-12基因在HeLa中的整合和表达情况。结果:重组质粒pL35P40SN经PA317细胞包装后收获病毒上清,感染HeLa细胞,检测发现IL-12基因整合到细胞基因组DNA中,并且能有效的转录。结论:成功包装了携带IL-12基因的逆转录病毒,该病毒能有效感染HeLa细胞,并使携带的基因IL-12在细胞中表达,为今后IL-12基因治疗宫颈癌的研究奠定基础。 张巨峰 陈艳娜 张文峰 王俊伟 牟艳芳 黄树林关键词:IL-12基因 逆转录病毒 宫颈癌 甘草水提物中miRNA对人免疫细胞基因表达的影响 被引量:25 2017年 微小RNA(micro RNA,miRNA)是一类在转录后水平调节基因表达的非编码小分子RNA,其调控基因表达、影响细胞活性的功能已为人们所重视。近年来miRNA的跨界调控成为新的研究方向,为人们更全面地认识和了解miRNA的功能提供了新的视角。植物miRNA由于通常经过了甲基化修饰,因此较为稳定,不易降解。前期研究表明,甘草干燥药材的水煎剂中存在着丰富的小分子RNA,这为了解甘草的作用机制提供了新的思路。在本研究中,利用从甘草水煎剂中提取的小分子RNA以及合成的miRNA模拟物(mimic)作用于分离自健康人的外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),然后利用RT-PCR对其模式识别受体(PRR)基因以及部分转录因子、信号分子和细胞因子的基因表达变化进行了分析。结果表明甘草miRNA对人免疫细胞的基因表达具有明显的调节作用,能够显著抑制T细胞分化相关基因的表达,以及炎症和凋亡相关基因的表达。这为进一步更全面地了解甘草的作用机制以及中药新药的研制带来了新的思路。 向静 黄洁嫦 徐畅 何免 徐鹏程 张丹 张文峰 沈晗 邵红伟关键词:小分子RNA 基因表达 生物制药专业本科生统计学课程开设的思考 被引量:1 2014年 统计学在生物制药专业本科学生培养中占有重要的地位,结合我院统计学教学的实际情况,提出有关统计学教学内容、教学方法的几点思考,希望对生物制药专业统计学课程本科教学提供参考。 张文峰关键词:生物制药专业 统计学课程