刘培庆
- 作品数：20 被引量：149H指数：9
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- NO对新生大鼠心肌细胞PKC活性的影响
- 2002年
- 利用培养新生大鼠心肌细胞 ,检测NO前体L -精氨酸 (L -arginine ,L -Arg)和NO供体硝普钠 (sodiumnitroprus side ,SNP)对PKC活性的影响 ,并探讨内、外源性NO在PKC激动剂佛波指 (phorbol 12 -myristate 13-acetate ,PMA)激活PKC中的作用 .实验结果表明 :培养基中加入L -Arg ,PKC活性呈剂量依赖性降低 ;用L -Arg进行预处理 ,30min后加入PMA ,PKC活性明显降低 ,与单纯PMA组相比有显著差异 ;NOS抑制剂L -NAME本身对基础状态PKC活性无明显影响 ,但可阻断L -Arg对上述 2个效应的影响 ;培养液中加入NO供体SNP ,PKC活性呈剂量依赖性降低 ;用SNP预处理心肌细胞 ,5min后加入PMA ,PKC活性与单纯PMA组相比有显著性差异 .以上结果表明 ,内、外源性NO均具有剂量依赖性抑制PKC活性的作用 ,PKC可能是NO对心肌细胞作用的胞内信号传导通路的关键部位或重要信号分子之一 ;L -Arg通过NOS先生成NO ,NO再对PKC起抑制作用 .
- 符史干吉丽敏谢协驹刘培庆潘敬运鲁伟
- 关键词：心肌细胞培养一氧化氮蛋白激酶C佛波酯
- ERKs及细胞内游离钙在内皮素-1诱导心肌细胞肥大反应中的作用被引量：13
- 2001年
- 目的 :研究细胞外信号调节激酶 (ERKs)及细胞内游离钙 ([Ca2 + ]i)在内皮素 - 1 (ET - 1 )介导心肌细胞肥大反应中的作用及机制。方法 :利用培养的新生大鼠心肌细胞 ,①以蛋白合成速率、蛋白含量及细胞表面积为心肌肥大反应的指标 ;②用滤纸法测定ERKs活性 ;③用Fura - 2 /AM作为钙荧光指示剂测定心肌 [Ca2 + ]i浓度。结果 :①ET - 1浓度依赖性增加新生大鼠心肌细胞蛋白质含量和心肌细胞表面积、ERKs活性及 [Ca2 + ]i浓度 ,以上作用可被ETA 受体拮抗剂BQ1 2 3所完全抑制 ,被百日咳毒素 (PTX)部分抑制 ,而ETB 受体拮抗剂BQ788则无效 ;②ERKs激酶特异性抑制剂PD980 5 9可完全抑制ET - 1激活ERKs的作用 ,钙通道拮抗剂硝苯地平可明显抑制ET - 1介导的[Ca2 + ]i浓度增加 ,但二者皆仅部分抑制ET - 1介导的心肌细胞肥大反应 ;③蛋白激酶C(PKC)选择性抑制剂stau rosporine并不能明显抑制ET - 1介导的ERKs激活 ,但可抑制ET - 1介导的的 [Ca2 + ]i浓度增加及心肌细胞肥大反应。结论 :ET - 1主要通过ETA 受体并经PTX敏感的G -蛋白介导心肌细胞肥大反应 ,该作用至少涉及两条途径 :①通过PKC介导的心肌 [Ca2 + ]i浓度增加 ;②不通过PKC介导的ERKs激活。
- 鲁伟刘培庆徐江王庭槐龚素珍潘敬运
- 关键词：内皮缩血管肽类肥大蛋白激酶C
- 新生鼠心室成纤维细胞条件培养液增加心肌细胞搏动频率的作用被引量：4
- 2000年
- 目的和方法 :利用细胞培养和RT PCR技术研究新生大鼠心脏成纤维细胞增加心肌细胞搏动频率的作用。结果 :成纤维细胞条件培养液在 48h内能明显增加心肌细胞的搏动频率 ,并具有时间依赖性和剂量依赖性 ,内皮素 1(ET 1)ETA 受体拮抗剂BQ12 3 能部分阻断成纤维细胞条件培养液增加心肌细胞搏动频率作用 ,而血管紧张素ⅡATl 受体拮抗剂CV 11974和α 肾上腺素受体拮抗剂Regitin却无此效果 :RT PCR的结果显示心室成纤维细胞、心肌细胞和皮肤成纤维细胞均有 ppET 1mRNA的表达 ,心室成纤维细胞中表达的丰度大于心肌细胞和皮肤成纤维细胞。百日咳毒素 (PTX)也能部分阻断成纤维细胞条件培养液增加心肌细胞搏动频率的作用。结论 :心室成纤维细胞能分泌ET 1等生物活性物质 ,对心肌细胞具有正性变时作用 ,同时提示分泌ET 1的功能并非心室成纤维细胞所特有 。
- 龚素珍刘培庆杨丹鲁伟潘敬运
- 关键词：成纤维细胞心肌细胞搏动频率ET-1
- 心室成纤维细胞条件培养液促进成纤维细胞增殖
- 2000年
- 目的 :探讨心室成纤维细胞条件培养液促进成纤维细胞自身增殖作用。方法 :利用成纤维细胞培养、同位素掺入率测定和RT PCR方法。结果 :心室成纤维细胞条件培养液能明显增加细胞自身的 [3H] 胸腺嘧啶核苷的掺入率 ,并具有剂量依赖性 ;促进细胞自身的c fos基因的表达 ,刺激后 1h达高峰。ETA 受体拮抗剂BQ12 3能部分阻断条件培养液增加成纤维细胞增殖的作用 ,而AT1受体拮抗剂CV11974和 (α 肾上腺素受体拮抗剂regitin无此效果。结论 :心室成纤维细胞能自分泌内皮素等生物活性物质 。
- 龚素珍刘培庆潘敬运
- 关键词：成纤维细胞胸腺嘧啶核苷MRNA条件培养液C-FOS基因
- 醛固酮促进心室成纤维细胞增殖作用被引量：3
- 2001年
- 探讨醛固酮促进心室成纤维细胞增殖作用。方法 :采用 [3H] TdR掺入率测定和RT PCR。结果 :醛固酮 (1× 10 -9～ 1× 10 -6)mol/L能明显促进心室成纤维细胞的 [3H] TdR掺入率 ,且呈剂量依赖方式 ;醛固酮孵育 15min ,可见c fosmRNA的表达 ,至 1h表达达高峰 ,以后逐渐降低 ,醛固酮受体拮抗剂螺旋内酯能阻断醛固酮的作用。结论 :醛固酮能促进心室成纤维细胞增殖 。
- 龚素珍刘培庆鲁伟谈智符史干潘敬运
- 关键词：醛固酮螺旋内酯C-FOSMRNA增殖作用
- 心室成纤维细胞分泌心肌营养活性蛋白的分离提纯及其作用
- 2002年
- 收集FCGM,用0.2μm微孔滤膜除去细胞碎片,再经Diaflo-YM-10滤膜超滤浓缩,截留分子量大于10 KD的FCGM,行Sephadex-G75凝胶层析,得到Ⅰ、Ⅱ两个洗脱峰。经生物学鉴定,证明Ⅰ峰洗脱液具有明显的心肌营养活性。将凝胶层析Ⅰ峰洗脱液透析、浓缩,行PAK200SW高效液相色谱分析,结果得到五个不同的洗脱峰。经生物学鉴定,第Ⅰ峰具有生物活性。将已行半制备高效液相色谱分析Ⅰ峰洗脱液透析、浓缩,再行高效液相色谱分析,结果获单一峰。用该单一峰物质行SDS-PAGE电泳,以标准蛋白质作对照,可知该单一峰中含有数种物质,分子量在25-35 KD。
- 龚素珍顾熊飞何光耀刘培庆潘敬运
- 关键词：提纯
- 血管紧张素Ⅱ介导的心肌细胞肥大反应中磷酸化MAPK的作用被引量：2
- 2000年
- 【目的】本研究主要是从丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)激活及失活角度研究该信号途径在血管紧张素Ⅱ (an giotensinⅡ ,AngⅡ )介导的心肌细胞肥大反应中作用。【方法】实验分别以 :①心肌细胞蛋白合成速率作为心肌肥大反应指标 ;②磷酸化MAPK蛋白 (p44MAPK、p42MAPK)表达反映MAPK活性状态。【结果】①AngⅡ (0 .1μmol/L)处理心肌细胞 48h ,可使3H 亮氨酸掺入明显增加 ,该作用可被CV11974明显抑制 (抑制 85 % ) ,而PD0 980 5 9可部分抑制该反应 (抑制 32 5 % ) ;②AngⅡ (0 .1μmol/L)处理心肌细胞 5min ,磷酸化MAPK蛋白表达即开始增加 ,30min左右达到高峰 ,2h基本恢复正常 ,血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体 (AT1)拮抗剂CV11974(0 .1mmol/L)或MAPK激酶 (MEK)特异性抑制剂PD0 980 5 9(5 0 μmol/L)可明显抑制AngⅡ介导的磷酸化MAPK蛋白表达 (30min时分别下降 89%及 81% )。【结论】AngⅡ主要通过AT1受体激活MAPK及介导心肌肥大反应 ,抑制MAPK的激活可减轻AngⅡ介导的心肌肥大反应。MAPK通路激活是AngⅡ介导的心肌肥大反应重要机制。
- 刘培庆鲁伟王庭槐潘敬运
- 关键词：丝裂原活化蛋白激酶心肌细胞磷酸化
- MAPK及MKP-1在肾性高血压大鼠心肌肥大过程中的变化被引量：6
- 2000年
- 【目的】研究肾性高血压大鼠 (renalhypertensiverats ,RHR)心肌肥大发生发展过程中心肌组织丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)活性、蛋白表达及丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶 (MKP 1)蛋白表达的变化以及血管紧张素Ⅱ (AngⅡ ) 1型受体(AT1)拮抗剂TCV116作用。【方法】①制作两肾一夹肾性高血压大鼠模型 ;②以左心室质量与体质量比值作为心肌肥大的指标 ;③以胶内MBP原位磷酸化法测定MAPK活性 ,以免疫印迹法检测MKP 1蛋白表达。【结果】①大鼠肾动脉狭窄术后 8周心肌肥大已发生 ,12周至 16周心肌肥大进一步加重 ;②术后 8周、12周、16周大鼠心肌组织MAPK活性逐渐增加 ,各周龄组MKP 1蛋白表达虽然均高于同周龄对照组 ,但随肾动脉狭窄时间延长呈下降趋势 ,心肌MAPK活性与心肌肥大程度呈显著正相关 ,而与MKP 1蛋白表达呈显著负相关。③TCV116可有效抑制心肌肥大及MAPK活性、MKP 1蛋白表达的变化。【结论】AngⅡ是介导两肾一夹肾性高血压大鼠心肌肥大的重要因子 ;AngⅡ主要通过AT1受体介导心肌肥大反应及MAPK激活 ;MAPK是心肌肥大的重要信号通路 ,随肾动脉狭窄时间的延长 ,MKP 1表达逐渐下降可能是导致MAPK持续激活并导致心肌肥大加剧的重要原因。
- 鲁伟刘培庆陈健文潘敬运
- 关键词：MAPKMKP-1肾性高血压心肌肥大
- 心室成纤维细胞促进新生大鼠心肌细胞肥大的作用被引量：1
- 2000年
- 【目的】研究新生大鼠心室成纤维细胞条件培养液促进心肌细胞肥大的作用。【方法】成纤维细胞和心肌细胞培养。【结果】成纤维细胞条件培养液能明显增大心肌细胞的表面积 ,增加心肌细胞的蛋白含量和 [3 H] 亮氨酸 ([3 H] Leu)的掺入 ,上述作用以第 3天的条件培养液作用最强 ,具有剂量依赖性。内皮素A受体 (ETAR)拮抗剂BQ12 3 能部分阻断成纤维细胞条件培养液促进心肌细胞肥大作用 ,而血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )的Ⅰ型受体拮抗剂CV11974和α 肾上腺素受体拮抗剂酚胺唑啉(regitin)却无此效果。百日咳毒素 (PTX)和蛋白激酶C(PKC)抑制剂staurosporine(ST)也能部分阻断成纤维细胞条件培养液促进心肌细胞肥大作用。【结论】成纤维细胞条件培养液 (FCGM)中含有促使心肌细胞肥大的物质 ,这些物质可能是内皮素 1(ET 1)等 ,培养液的促肥大作用可能与PTX敏感的G蛋白及PKC有关。
- 龚素珍刘培庆鲁伟符史干潘敬远
- 关键词：成纤维细胞细胞培养心肌细胞肥大
