目的 扩增嗜肺军团菌 mip基因 ,导入载体 p UC18和 pc DNA3.1(+) ,构建重组质粒 p L pmip和pc DNA3.1- mip。方法 采用 PCR从嗜肺军团菌扩增得到 mip基因 ,导入载体 p UC18和 pc DNA3.1(+) ,构建重组质粒p L pmip和 pc DNA3.1- mip并转化大肠杆菌 ,用限制性酶切分析、PCR、序列分析进行鉴定。结果 扩增出 82 8bp的 mip基因 ;构建重组质粒 p L p Mip和 pc DNA3.1- mip。结论 成功扩增 82 8bp的嗜肺军团菌 Mip基因 ,构建重组质粒 p L p Mip和 pc DNA3.1- mip。
目的构建霍乱毒素A亚基基因(ctxA)和B亚基基因(ctxB)的融合表达载体,并在原核系统表达,为霍乱毒素(CT)免疫原性的研究及其作为免疫佐剂的研究提供基础。方法以霍乱弧菌DNA为模板,利用重叠PCR技术,扩增出含有ctxA和ctxB的融合基因片段ctxAB,并与带有硫氧还蛋白(Trx)基因的高效原核表达质粒pET32a(+)定向重组,构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)。经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,以IPTG诱导表达TrxBB-CTAB融合蛋白,用SDS-PAGE及W estern b lot进行鉴定。结果限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,扩增出了霍乱弧菌1 158bp的ctxAB融合基因,成功构建了重组质粒pET-ctxAB,SDS-PAGE及W estern b lot分析显示重组质粒pET-ctxAB在原核系统中得到了高效融合表达。结论霍乱弧菌ctxA基因和ctxB基因通过重叠PCR成功地融合在一起,融合基因ctxAB在大肠杆菌中得到了高效表达。
目的 观察雷公藤多甙 (TWP)对终板膜乙酰胆碱受体 (n ACh R)的反应性的作用。方法 在不均匀牵张法制动的蟾蜍缝匠肌标本上 ,利用微电泳氯化乙酰胆碱 (ACh Cl)技术 ,在终板区引起的乙酰胆碱电位 (ACh P)来反映终板膜 n ACh R的反应性。结果 12 0 mg/ L TWP组 ,用药 2 0 m in后 ACh P振幅明显升高 ,4 0 mg/ L 和 6 0mg/ L TWP组 ,用药 10 m in后 ACh P振幅明显升高 ;2 2 0 mg/ L 和 4 0 m g/ L TWP组内 ,ACh P振幅除 80 m in组外 ,其它各时间组间有显著性差异 (P<0 .0 5 ) ,6 0 min达最大值 ;36 0 mg/ L TWP组 ,在用药后 4 0 m in、 6 0 m in和80 m in均记录到动作电位 (AP) ;4药物各浓度组引起的 ACh P振幅变化率之间有显著差异 (P<0 .0 5 ) ,其中 6 0mg/ L TWP组引起的变化率最大。结论 TWP能提高终板膜 n ACh R的反应性 。
