夏苗苗 作品数:19 被引量:20 H指数:3 供职机构: 中国科学院天津工业生物技术研究所 更多>> 发文基金: 天津市自然科学基金 更多>> 相关领域: 轻工技术与工程 化学工程 生物学 农业科学 更多>>
代谢工程改造嘌呤合成途径以提高核黄素产量 2022年 核黄素又名维生素B_(2),是人体必不可少的营养物质之一,而鸟苷三磷酸则是核黄素合成的重要前体。为在高产菌株的基础上进一步提高核黄素产量,该研究以高产核黄素的枯草芽孢杆菌S1为出发菌株,利用CRISPER/Cas9介导的基因组碱基编辑技术对嘌呤合成途径阻遏蛋白基因以及鸟嘌呤核苷酸(guanylate,GMP)还原酶基因进行失活,并利用质粒过表达的方法进行了一系列的代谢工程改造。结果显示,guaC基因的失活阻断了GMP到肌苷酸的回补途径,使GMP得到积累,使核黄素产量达到3.04 g/L,而purR基因的失活没有效果;使用PvegI启动子过表达希瓦氏菌来源的ribA后,核黄素产量提高到3.33 g/L。将失活guaC基因与PvegI启动子过表达希瓦氏菌ribA结合,最终使核黄素产量达到3.43 g/L,较出发菌株核黄素产量提升22%,转化率提升25.8%。 谷振宇 夏苗苗 苏媛 刘川 罗华军 张大伟关键词:核黄素 过表达 核糖核苷酸还原酶转录抑制因子突变体、突变基因及其在制备维生素B2中的应用 本发明公开了一种核糖核苷酸还原酶转录抑制因子突变体、突变基因及其在制备维生素B<Sub>2</Sub>中的应用。其中所述突变体的氨基酸序列相对于SEQ ID No.3所示序列存在下述突变:第26位氨基酸替换为H。对枯草芽... 张大伟 夏苗苗 刘川 孙宜文一株高产核黄素工程菌株及其应用 本发明公开了一种核黄素工程菌及其构建方法,其保藏编号为:CGMCC NO.16132。通过基因工程手段构建核黄素营养缺陷型菌株,随后染色体整合表达解淀粉芽孢杆菌解调的核黄素操纵子,恢复了菌株的核黄素生产能力,并通过表达载... 张大伟 夏苗苗 刘川 付首颖 孙宜文文献传递 筛选脱氮假单胞菌启动子提高维生素B_(12)产量 被引量:3 2017年 维生素B_(12)(VB_(12)/钴胺素)具有多种生理学功能,广泛应用于制药、食品等行业。脱氮假单胞菌是维生素B_(12)常用工业菌株之一。通过筛选高表达启动子来过表达VB_(12)合成途径基因,能有效提高菌株的VB_(12)生产能力。通过对脱氮假单胞菌中某些编码热激蛋白和分子伴侣基因前含启动子在内的非编码序列用启动子在线预测软件进行分析,选取P_(ibpA)、P_(cbpA)、P_(dnaJ)、P_(htpG)、P_(dnak)、P_(grpE)的非编码区与编码绿色荧光蛋白的GFP报告基因相连,通过酶标仪检测GFP的荧光信号值,对编码热激蛋白和分子伴侣基因前的非编码区所含有的启动子的表达强度进行评估,以获得高表达的启动子对VB_(12)合成途径的基因进行过表达。结果表明,含有启动子P_(dnak)的非编码区,其表达的GFP荧光值最高。进而构建强启动子P_(dnak)与维生素B_(12)合成途径基因cobA的过表达重组菌,发酵数据表明,与对照菌株相比重组菌株维生素B_(12)产量提高21.5 mg/L。筛选高表达启动子用于维生素B_(12)合成途径关键基因的表达,是一种有效的提高维生素B_(12)产量的方法。 王玲玲 夏苗苗 董会娜 朱蓓薇 张大伟关键词:强启动子 维生素B12 GIBSON ASSEMBLY 一株高产核黄素工程菌株及其应用 本发明公开了一种核黄素工程菌及其构建方法,其保藏编号为:CGMCC NO.16132。通过基因工程手段构建核黄素营养缺陷型菌株,随后染色体整合表达解淀粉芽孢杆菌解调的核黄素操纵子,恢复了菌株的核黄素生产能力,并通过表达载... 张大伟 夏苗苗 刘川 付首颖 孙宜文文献传递 翻译起始因子突变体、突变基因及其在制备维生素B<Sub>2</Sub>中的应用 本发明公开了一种翻译起始因子突变体、突变基因及其在制备维生素B2中的应用。其中所述突变体的多肽氨基酸序列相对于SEQ ID No.3所示序列仅存在下述突变:第18位脯氨酸突变为亮氨酸。本发明以翻译起始因子infA为基础,... 张大伟 夏苗苗 刘川 杜广庆 房欢一种苜蓿中华根瘤菌株及其组合物与应用 本发明公开了一种能够用于发酵生产维生素B<Sub>12</Sub>的苜蓿中华根瘤菌,其保藏号CGMCCNo.9638。本发明还公开了苜蓿中华根瘤菌发酵生产维生素B<Sub>12</Sub>的生产和制备方法,包括菌株的发酵... 张大伟 李莎 夏苗苗 房欢 周文娟 郑平文献传递 过氧化物转录抑制因子突变体、突变基因及其在制备维生素B2中的应用 本发明公开了一种过氧化物转录抑制因子突变体、突变基因及其在制备维生素B<Sub>2</Sub>中的应用。其中所述突变体的氨基酸序列相对于SEQ ID No.3所示序列存在下述突变:第71位氨基酸替换为V。对枯草芽孢杆菌染... 张大伟 孙宜文 夏苗苗 刘川文献传递 一株高产辅酶Q10的类球红细菌突变菌株及其应用 本发明公开了一株高产辅酶Q10的突变菌株,其保藏编号为:CGMCC No.22200。该菌株是富集分离得到的辅酶Q10含量高的类球红细菌通过诱变和筛选而获得的一株高产辅酶Q10的突变株。本发明还公开了该突变菌株在生产辅酶... 张大伟 夏苗苗文献传递 常压室温等离子体(ARTP)诱变及高通量筛选维生素B_(12)高产菌株 被引量:8 2018年 采用常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)诱变脱氮假单胞菌(Pseudomonas denitrificans)并从中筛选高产维生素B12突变株,确定等离子诱变最优处理时间75,s、输出功率100,W.通过流式细胞仪并结合核糖开关(riboswitch)感应元件检测其荧光值以初筛诱变后高产菌株,并利用48孔板高通量培养发酵,酶标仪快速检测维生素B_(12)产量,建立完整的诱变后高通量筛选体系.通过4轮ARTP诱变,筛选得到的突变株PA320-M4-1B1在250,mL摇瓶发酵6,d的条件下,维生素B_(12)产量达到(103.2±2.1)mg/L,较初始菌株PA320的(71.9±1.8)mg/L提高了43.8%,且遗传性状稳定. 蔡莹瀛 夏苗苗 董会娜 张同存 张大伟关键词:维生素B12 核糖开关 高通量筛选