许国超
- 作品数：38 被引量：53H指数：5
- 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程理学更多>>
- 糖基转移酶UGT73C5在大肠杆菌中的可溶性表达研究被引量：1
- 2023年
- 络塞是一种抗高原反应药物的主要活性成分,可通过尿苷二磷酸糖基转移酶UGT73C5催化肉桂醇糖基化反应合成。然而UGT73C5在大肠杆菌宿主中可溶性表达极差,严重限制了其工业应用。该研究分别通过与分子伴侣共表达和与助溶蛋白标签融合表达的方式,提高UGT73C5在Escherichia coli BL21(DE3)中的可溶性表达。结果显示,除质粒pKJE7外,与分子伴侣质粒pG-KJE8、pGro7和pG-TF2共表达后均可提高UGT73C5酶活力,分别为原始酶活力(18.56 U/g细胞)的1.27、1.18、1.37倍。此外,利用硫氧还蛋白(thioredoxin,Trx)和谷胱甘肽巯基转移蛋白(glutathione S-transferase,GST)两种助溶蛋白标签,构建的融合酶Trx-UGT73C5和GST-UGT73C5的酶活力为原始酶活力的1.45、2.54倍,且纯化后的比酶活力为原始酶的80%~90%。最后,在2 mmol/L肉桂醇合成络塞的反应中,相同浓度细胞破碎液(粗酶)融合酶GST-UGT73C5比原始酶催化效率更高,4 h后转化率可以达到90%以上,最终转化率达到93.6%。因此,助溶蛋白标签融合表达法可有效提高UGT73C5在大肠杆菌中的可溶性表达,且融合酶GST-UGT73C5在络塞的酶法合成中具有更大的应用潜力。
- 方红辉倪晔周婕妤董晋军许国超张兆俊韩瑞枝
- 关键词：糖基转移酶可溶性表达分子伴侣肉桂醇
- 浅谈《生物催化工艺学》教学内容和教学方法的改进
- 2016年
- 《生物催化工艺学》是生物工程和生物技术专业的重要课程之一。针对生物催化工艺学课程的特点,应当将生物催化研究及行业发展的最新方法和成果及时充实到教学内容中,并对教学方法和考核方式进行改革,提升教学效果和学生的综合能力。以学生为中心,教学相长,激发学生的学习热情,采用灵活的授课和考核方式,增加学生的学习主动性,为国民经济的发展提供更多的生物化工专业技术人才。
- 许国超倪晔
- 关键词：教学内容教学方法
- 硫酸盐还原菌的分离纯化及生长特性研究被引量：8
- 2011年
- 硫酸盐还原菌(SRB)是一类形态各异、营养类型多样,在缺氧或厌氧的条件下,能利用硫酸盐或者其他氧化态硫化物作为电子受体来氧化有机物的细菌或古菌,可以是革兰氏阴性或阳性。SRB所引起的微生物腐蚀受到了人们的广泛关注。本次实验是以西南石油大学附近的加油站淤泥为主要原料,采用叠皿夹层法对富集后的淤泥进行分离纯化,然后在不同的生长条件下(pH值,矿化度)对其生长特性分别进行研究。经实验研究得到如下结论:在pH值小于5.0和大于9.5时,硫酸盐还原菌是不能存活的,而在pH值为7.5时为硫酸盐还原菌最适生长pH值。SRB可以生长繁殖的矿化度范围是7.5～30 g/L,16 g/L时为其生长繁殖最适矿化度。
- 陈一鸣吴雁马远荣许国超曲韵滔史素青
- 关键词：硫酸盐还原菌分离纯化PH值温度矿化度
- 低共熔溶剂和次氯酸钠组合预处理秸秆及在丁醇发酵中的应用被引量：5
- 2020年
- 随着传统化石能源日趋枯竭,木质纤维素生物质等可再生资源的综合利用得到越来越多的关注。为了更好地利用木质纤维素生物质,采用物理、化学或生物方法降低其结构顽抗性是必不可少的步骤。在前期研究中,本文作者所在实验室发现了一种乙胺盐酸盐为氢键受体、乳酸为氢键供体的新型低共熔溶剂(EaCl∶LAC),其对玉米芯有很好的去除半纤维素的作用。本文将EaCl∶LAC用于预处理水稻秸秆,并结合碱性氧化剂NaClO,进一步提高了木质素的去除率。在最优条件下,经EaCl∶LAC/NaClO预处理后水稻秸秆的半纤维素和木质素的去除率分别为94.9%和80.2%。将预处理后水稻稻秆经纤维素酶解可得到总还原糖浓度为60.46g/L的秸秆水解液。采用梭菌Clostridium saccharobutylicum DSM13864利用稻秆水解液进行丁醇发酵,72h后丁醇浓度为10.16g/L,丁醇的糖醇产率为0.22g/g(total sugar)。本文提供了一种提高木质纤维素生物质酶解效率和水解液还原糖浓度的方法,无需外源添加葡萄糖和脱毒处理,可直接用于发酵合成生物丁醇。
- 李浩邢婉茹许国超倪晔
- 醇脱氢酶催化合成(S)-哌啶醇及产物抑制机制
- 2021年
- (S)-N-Boc-3-羟基哌啶((S)-NBHP)是治疗套细胞淋巴瘤药物——依鲁替尼的关键手性中间体。利用醇脱氢酶催化N-Boc-3-哌啶酮(NBPO)的不对称还原是最具开发潜力的(S)-NBHP合成方法。对醇脱氢酶库进行筛选发现,来源于多孢克鲁维酵母的KpADH对NBPO具有最佳的催化效果,纯酶活力高达83.9 U/mg,产物对映体过量值为97.0%(S)。将其与葡萄糖脱氢酶偶联,并考察了单水相、两相、离子液体和不同底物浓度对转化反应的影响。结果表明:高浓度产物(S)-NBHP对KpADH存在抑制作用,抑制动力学分析表明属于非竞争性抑制。采用单水相体系可降低(S)-NBHP对KpADH催化反应的抑制,有利于转化效率的提高。初步探究了醇脱氢酶催化NBPO不对称还原反应的抑制现象,对酶法合成(S)-NBHP具有指导意义。
- 吴彦霏许国超周婕妤倪晔
- 关键词：醇脱氢酶
- 双芳基醇脱氢酶的立体选择性识别机制探究
- 光学纯的双芳基醇是一类重要的手性砌块化合物，可广泛地用于药物、农业化学品和天然产物的合成，如：抗组胺药、止痛药和镇咳药。光学纯(4-氯苯基)-(吡啶-2-基)甲醇(CPMA)是合成抗组胺倍他司汀类药物的重要手性中间体，可...
- 周婕妤许国超倪晔
- 关键词：醇脱氢酶生物催化
- 复杂错流多效蒸发系统设计的模型与解法
- 2013年
- 为了实现能量的有效利用以及满足不同性质原料液的蒸发,对蒸发过程采用额外蒸汽引出、冷凝水闪蒸的节能措施,建立了多效错流蒸发的系统模型。用迭代法结合矩阵法对模型求解。研究表明,多效错流蒸发系统模型有通用性。对溶液蒸发采用冷凝水闪蒸、多效蒸汽引出预热原料液的模型进行设计表明,求解模型稳定且效率较高。
- 许国超王金玉马远荣刘阳
- 关键词：多效蒸发二次蒸汽数学模型
- 酪氨酸脱羧酶的可溶性表达优化及酶法合成酪胺的研究
- 酪胺是一种自然存在的痕量单胺，具有多种生理生化功能，在医药、保健和化妆品方面具有广泛应用。目前酪胺的制备方法包括化学合成法、生物发酵法和生物催化法。化学合成过程中存在环境污染严重、产物提取工艺复杂的问题;生物发酵法培养基...
- 姜明扬许国超倪婕倪晔
- 关键词：酪胺可溶性表达
- arcA基因提高大肠杆菌对有机溶剂的耐受性被引量：1
- 2016年
- 【目的】将来源于恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida JUCT1)的基因arc A(编码精氨酸脱亚胺酶)整合到Escherichia coli JM109(DE3)基因组中,以提高该菌对有机溶剂的耐受性。【方法】以P.putida JUCT1的基因组为模板扩增基因arc A,并与p ET-20b(+)连接后导入E.coli JM109(DE3)中,验证该基因提高E.coli JM109(DE3)对有机溶剂的耐受性。利用Red同源重组的方法将arc A整合到E.coli JM109(DE3)基因组中。【结果】E.coli JM109(DE3)/p ET-20b(+)-arc A在添加了2.0%(体积比)环己烷、0.1%(体积比)甲苯、4.0%(体积比)萘烷和0.1%(体积比)丁醇的培养基中培养8 h后,其OD660由初始的0.2分别上升到0.8、0.9、1.8和1.3。将arc A成功整合到E.coli JM109(DE3)基因组中,获得了具有较好遗传稳定性的溶剂耐受E.coli JM109(DE3)宿主菌株。【结论】外源基因arc A能提高大肠杆菌菌株的有机溶剂耐受性,为工业化应用中耐溶剂微生物菌株的构建提供了实验依据和理论基础。
- 张法韩瑞枝许国超董晋军倪晔
- 关键词：精氨酸脱亚胺酶RED同源重组有机溶剂耐受性恶臭假单胞菌大肠杆菌
- 谷氨酸棒状杆菌CRISPR-Cpf1和Cre/loxP基因敲除技术的比较被引量：5
- 2019年
- 【背景】谷氨酸棒状杆菌的基因敲除系统较为匮乏且效率不高,难以对其进行代谢工程改造,不利于高性能工业菌株的构建及规模生产。【目的】分别采用CRISPR-Cpf1和Cre/loxP基因敲除系统对谷氨酸棒状杆菌ATCC13032(CorynebacteriumglutamicumATCC13032)基因组上的argR和argF基因进行敲除,比较两种敲除方法的优缺点,为合理选择敲除系统提供依据。【方法】特异性重组的Cre/loxP敲除系统是首先利用同源重组将基因组上的靶基因替换为两端带有重组位点loxP的kanR片段,然后由重组酶Cre识别loxP位点并发生重组反应,从而去除替换到基因组上的kanR片段,进一步利用质粒的温敏特性将其消除,从而实现靶基因的敲除。CRISPR-Cpf1敲除系统是利用Cpf1对pre-crRNA进行加工,形成的成熟crRNA引导Cpf1识别和结合到靶DNA的特定序列上并切割双链DNA分子,通过同源重组作用去除靶基因,基于质粒自身的温敏特性将其消除,从而完成基因敲除的整个过程。【结果】Cre/lox P系统可在8N+2 d内完成N轮迭代基因敲除,而CRISPR-Cpf1系统可在5N+2d内完成N轮迭代基因无痕敲除,理论上还可以一次对多个靶位点进行编辑,效率更高,但存在同源重组效率较低、假阳性率高等缺点。【结论】与Cre/loxP系统相比,CRISPR-Cpf1辅助的同源重组基因敲除方法可省时、省力地实现基因的无痕敲除,理论上还可实现多个基因的同时敲除、总体效率更高,然而编辑效率还有提高的空间。
- 占米林阚宝军张辉董晋军许国超韩瑞枝倪晔
- 关键词：谷氨酸棒状杆菌同源重组基因敲除
