沈忱
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
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- 相关领域：生物学更多>>
- 乙酰氨基葡萄糖转移酶KfiA的共表达与纯化被引量：1
- 2014年
- 在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达并纯化大肠杆菌K5中合成肝素前体的关键酶Kfi A,为生物酶法合成肝素提供参考。提取大肠杆菌K5的基因组DNA,用PCR方法扩增目的基因,并将其克隆到表达载体p ET-21b中,使用限制性内切酶Bam HⅠ和XhoⅠ酶切鉴定并进行DNA测序;将该重组表达载体与分子伴侣p Gro7共转化大肠杆菌BL21(DE3),用L-阿拉伯糖和IPTG诱导表达,并对不同表达条件下的产物进行SDS-PAGE分析,优化表达条件;采用His Trap FF琼脂糖凝胶柱对目的蛋白进行亲和纯化,并通过蛋白印迹法鉴定目的蛋白。结果:克隆出Kfi A目的基因,构建了融合表达质粒p ET-21b/Kfi A;SDS-PAGE检测表明获得了目的蛋白,用His Trap FF琼脂糖凝胶柱纯化并通过蛋白印迹法确定得到纯度较高的蛋白。为进一步研究生物酶法合成肝素打下基础。
- 沈忱王杰缪小亮王莹吴洁王玉峰陈向东尹鸿萍
- 关键词：大肠杆菌分子伴侣共表达纯化
