目的建立适用于肺炎支原体(mycoplasma pneumoniae,MP)的双向电泳技术。方法对双向电泳实验中的三个关键因素:全蛋白提取量、固相PH梯度胶条范围、蛋白上样量进行摸索,比较和分析标准株FH电泳图谱,利用液相色谱串联质谱技术(LC-MS/MS)鉴定部分蛋白斑点。结果采用菌液离心结合超声破碎的方法提取全蛋白,上样量为2mg,固相PH梯度胶条选取PH4-7,可以得到蛋白点分布均匀的双向电泳图谱,蛋白点数为60±2。利用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术成功获得了分子伴侣蛋白(Chaperone protein DnaK),鉴定成功率为100%。结论成功建立了适用于肺炎支原体蛋白质组分析的双向电泳技术条件,为肺炎支原体蛋白质组学的研究提供一个可靠的技术平台。
