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转基因苜蓿草KK179-2品系特异性实时荧光PCR检测方法的建立: 2017年; 根据转基因低木质素苜蓿草品系KK179-2 5’端外源插入序列与苜蓿草基因组DNA之间的邻接区序列设计引物和探针,建立了KK179-2品系特异性实时荧光PCR检测方法,并对其特异性、灵敏度及可重复性进行了测定。结果表明:建立的定量实时荧光PCR检测方法特异性良好;标准曲线线性相关系数(R^2)为0.99,扩增效率E为105%;检测限为20拷贝,定量限为200拷贝。重复性实验显示本方法的标准偏差(SD)及相对标准偏差(RSD)都在可接受范围内。综上,建立的KK179-2品系特异性定量PCR检测方法适于快速、准确、稳定地对转基因苜蓿草KK179-2品系进行检测。; 刘二龙卢丽吕英姿蒋湘李嘉琪林学勤杜雅萍郑高彬

转基因苜蓿草J163品系特异性实时荧光PCR检测方法的建立被引量：4: 2015年; 目的建立针对我国农业部未颁发农业转基因生物安全证书的转基因苜蓿草品系J163品系特异性实时荧光(Polymerase Chain Reaction,PCR)检测方法。方法利用Taq Man实时荧光PCR(real-time PCR)技术,根据转基因苜蓿草品系J163 5’端外源插入片段P-e FMV与苜蓿草基因组DNA之间的邻接区序列设计引物和探针,建立了转基因苜蓿草J163品系特异性实时荧光PCR检测方法,并对本方法的特异性、灵敏度及可重复性进行了测定。结果建立的检测方法特异于转基因苜蓿草J163成分检测,检测最低DNA浓度为(1imit of detection,LOD)为15 pg,相当于9拷贝转基因苜蓿草J163基因组DNA,重复性试验显示,其标准偏差(Standard deviation,SD)和相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均在可接受范围内。结论本研究建立的转基因苜蓿草J163品系特异性实时荧光PCR检测方法特异性好,灵敏度高,能够快速、准确、稳定地对转基因苜蓿草J163成分进行检测分析。; 刘二龙卢丽吕英姿蒋湘张旺林惠娇郑高彬唐婕林学勤秦焯敏; 关键词：实时荧光PCR

转基因苜蓿草J101品系特异性定性PCR检测方法的建立被引量：1: 2015年; 目的建立转基因苜蓿草J101品系特异性定性PCR检测方法。方法根据转基因苜蓿草品系J101 5’端外源插入片段与苜蓿草基因组DNA之间的邻接区序列设计引物,建立了转基因苜蓿草J101品系特异性定性PCR检测方法,并对本方法的特异性、灵敏度进行了测定。结果建立的检测方法特异于转基因苜蓿草J101检测,检测最低DNA浓度为(1imit of detection,LOD)为80 pg,相当于50拷贝转基因苜蓿草J101基因组DNA。结论本研究建立的转基因苜蓿草J101品系特异性定性PCR检测方法特异性好,灵敏度高,能够快速、准确地对转基因苜蓿草J101进行检测分析。; 刘二龙卢丽吕英姿蒋湘张旺唐婕郑高彬林学勤符其姣

单增李斯特菌三重实时荧光PCR检测的建立及其毒力基因在分离菌株中分布被引量：8: 2016年; 目的建立同时检测单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)溶血素基因hlyA、内化素基因inlA和磷脂酶C基因plcB的TaqMan-MGB三重实时荧光PCR检测方法,并对101株单增李斯特菌的hlyA、inlA和plcB基因进行了检测,分析3个毒力基因在多位点序列分型(Multilocus sequence typing,MLST)聚类群组中的分布情况。方法根据单增李斯特菌毒力基因hlyA、inlA和plcB的保守序列设计引物和小沟结合物(minor groove binder,MGB)探针建立三重荧光PCR方法,对其特异性、灵敏度和可重复性进行了测试,并对分离的101株单增李斯特菌进行三重PCR检测。结果建立的三重实时荧光PCR方法特异于单增李斯特菌的检测,重复性良好,组内Ct值变异系数均小于1.5%,灵敏度可达100CFU/mL。对101株单增李斯特菌的hlyA、inlA和plcB的检出率分别为98%、75%和98%。在可被MLST分型的89株菌株中,groupI的30株菌株有20株均缺失inlA基因;groupII的57株菌株中有56株三个基因均检出;groupIII的菌株hlyA、inlA和plcB三个基因均未检出。结论本文建立的三重实时荧光PCR方法能准确、快速、稳定的检测单增李斯特菌,101株单增李斯特菌的hlyA、inlA、plcB三个毒力基因的检出情况与单增李斯特菌的MLST分型聚类有较一致的关系,对分析单增李斯特菌毒力的强弱有重要参考意义。; 刘二龙袁慕云吕英姿陈颖王娉许龙岩李嘉琪郑高彬杜雅萍林学勤; 关键词：单增李斯特菌多位点序列分型

转基因苜蓿草J163品系特异性LAMP检测方法的建立被引量：4: 2015年; 目的建立针对我国农业部未颁发农业转基因生物安全证书的转基因苜蓿草品系J163品系特异性等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法。方法根据转基因苜蓿草品系J163 5’端外源插入片段与苜蓿草基因组DNA之间的邻接区序列设计6条引物,建立了转基因苜蓿草J163品系特异性LAMP检测方法,并对本方法的特异性、灵敏度进行了测定。结果建立的检测方法特异于转基因苜蓿草J163成分检测,检测最低DNA浓度为(1imit of detection,LOD)为16 pg,相当于10拷贝转基因苜蓿草J163基因组DNA。结论本研究建立的转基因苜蓿草J163品系特异性LAMP检测方法特异性好,灵敏度高,能够快速、准确、稳定地对转基因苜蓿草J163成分进行检测分析。; 刘二龙卢丽吕英姿蒋湘张旺林惠娇郑高彬唐婕林学勤秦焯敏

可视化LAMP法快速检测转基因苜蓿草J101品系被引量：2: 2015年; 目的建立我国农业部未颁发农业转基因生物安全证书的转基因苜蓿草J101品系特异性环介导等温扩增(loop–mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法。方法根据转基因苜蓿草品系J101 3’端外源插入片段与苜蓿草基因组DNA之间的邻接区序列设计6条引物,建立转基因苜蓿草J101品系特异性LAMP检测方法,并对本方法的特异性、灵敏度进行了测定。结果建立的检测方法特异于转基因苜蓿草J101成分检测,检测最低DNA浓度为(1imit of detection,LOD)为16 pg,相当于10拷贝转基因苜蓿草J101基因组DNA。结论本研究建立的转基因苜蓿草J101品系特异性LAMP检测方法特异性好,灵敏度高,能够快速、准确、稳定地对转基因苜蓿草J101成分进行检测分析。; 刘二龙卢丽吕英姿蒋湘张旺林惠娇郑高彬唐婕林学勤秦焯敏; 关键词：环介导等温扩增

转基因苜蓿草J101品系特异性实时荧光PCR检测方法的建立被引量：6: 2015年; 本文针对转基因苜蓿草品系J101,设计引物及探针建立J101品系特异实时定量PCR检测体系。结果表明,本文建立的定量实时PCR检测方法特异性良好。实时荧光定量PCR检测方法的检测下限为10拷贝J101基因组DNA,定量检测下限为50拷贝的J101基因组DNA,本方法建立的标准曲线线性相关系数(R2)为0.993,扩增效率E为110%,重复性实验显示本方法的标准偏差(SD)及相对标准偏差(RSD)都在可接受范围内。本文建立的J101品系特异性定量PCR检测方法适于快速、准确、稳定地对转基因苜蓿草J101品系进行检测。; 刘二龙卢丽吕英姿蒋湘张旺唐婕郑高彬林惠娇秦焯敏林学勤

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