张志慧
- 作品数：5 被引量：13H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 在体内外模拟的乳腺脂肪微环境中研究BMP9对乳腺癌细胞生长的影响被引量：1
- 2016年
- 骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic proteins,BMP9)是骨形态发生蛋白(bone morphogenetic proteins,BMPs)家族的一员,具有多种生物学功能。本实验主要是从体内、外两个层面模拟的脂肪微环境中,研究BMP9对乳腺癌细胞生长的影响。将前脂肪细胞3T3-L1诱导为成熟脂肪细胞后,利用Transwell小室共培养技术,将其分别与MDA-MB-231细胞、感染腺病毒AdGFP的对照MDA-MB-231/AdGFP细胞、感染腺病毒AdBMP9的MDA-MB-231/AdBMP9细胞进行共培养。针对共培养体系中的肿瘤细胞,采用EdU实验检测增殖能力的变化;流式细胞术检测细胞周期变化;Western blot检测cyclin D1、c-myc蛋白水平的变化。将乳腺癌细胞与脂肪细胞以1:5的比例混合后,注射到裸鼠皮下,监测瘤体的生长并绘制生长曲线;取离体肿瘤组织进行免疫组化染色,检测瘤体中ki67、cyclin D1和c-myc的表达情况。结果显示,显微镜下可以观察到诱导后的3T3-L1细胞出现明显脂滴,能被油红O染色,证明成熟脂肪细胞诱导成功;AT-PCR及Western blot证实BMP9过表达成功;BMP9可以抑制共培养体系中肿瘤细胞的增殖(p<0.05),使其周期阻滞在G_2/M期(p<0.05),并降低cyclin D1和c-myc的蛋白水平(p<0.05)。动物移植瘤实验发现,BMP9高表达实验组的瘤体明显小于空白组和载体感染对照组;瘤体免疫组化结果显示,实验组ki67、cyclin D1和c-myc的表达均明显下调。本研究证明在体内、外模拟的脂肪微环境中,BMP9可以抑制乳腺癌细胞的增殖,且这种作用可能是通过下调cyclin D1和c-myc来实现的。
- 王婷王晋蜀张志慧姜亚运夏菁苟理尧刘梦瑶张彦
- 关键词：乳腺肿瘤细胞生长
- 在体外模拟的骨微环境中下调BMP9对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖、迁移的影响及其可能机制被引量：1
- 2013年
- 探讨在体外模拟的乳腺癌骨转移微环境中,采用RNAi技术下调骨形态发生蛋白9(bone morphogenetic protein 9,BMP9)基因对人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖、迁移的影响及可能机制。用Transwell小室将空白组SK-BR-3细胞、感染腺病毒AdRFP的对照组SK-BR-3/RFP细胞、感染腺病毒AdsiBMP9的实验组SK-BR-3/siBMP9细胞分别与人骨髓基质HS-5细胞间接共培养后,MTT增殖实验、划痕愈合实验、Transwell迁移实验分别检测下调BMP9对SK-BR-3细胞增殖、迁移的影响;RT-PCR和Western blot法检测相关因子的变化。结果显示,在共培养体系中,SK-BR-3/siBMP9组的BMP9显著低于对照组(P<0.05);下调BMP9可有效促进SK-BR-3/siBMP9细胞增殖(P<0.05),SK-BR-3/siBMP9细胞的划痕愈合率、穿膜细胞数也明显升高(P<0.05);SK-BR-3/siBMP9组血管内皮细胞生长因子(VEGF)、结缔组织生长因子(CTGF)mRNA和蛋白表达均显著上调(P<0.05),且Western blot结果显示p-AKT显著上调(P<0.05)。综上,在骨转移微环境中,干扰BMP9表达可促进人乳腺癌SK-BR-3细胞增殖及迁移,其作用机制可能与上调VEGF、CTGF表达有关,且这个过程可能涉及PI3K/AKT通路的激活。
- 陈莹莹王维刘月红万绍恒张志慧王婷王晋蜀张彦
- 关键词：乳腺肿瘤共培养
- 乳腺癌微环境中脂肪细胞可通过瘦素促进乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖与迁移被引量：6
- 2016年
- 为研究乳腺癌微环境中前脂肪细胞和成熟脂肪细胞对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和迁移能力的影响,该研究将前脂肪细胞3T3-L1诱导为成熟脂肪细胞,再将前脂肪细胞和成熟脂肪细胞分别与乳腺癌MDA-MB-231细胞共培养,通过显微镜成像、油红O染色实验、MTT实验、Transwell实验分别观察肿瘤细胞形态、增殖及迁移能力的改变。Western blot和ELISA检测前脂肪细胞和成熟脂肪细胞瘦素(leptin)的表达水平。细胞免疫荧光法和Western blot分别检测肿瘤细胞中瘦素受体(leptin recepter,Ob-R)、瘦素信号通路关键分子及下游靶因子的表达水平变化。结果显示,共培养后,肿瘤细胞形态变得更加纤长,增殖能力增加(P<0.05),穿过小室的细胞数明显增多(P<0.05)。在成熟脂肪细胞共培养组的肿瘤细胞中还出现了明显的脂质累积。Western blot和ELISA检测发现,前脂肪细胞和成熟脂肪细胞均有瘦素的表达。与空白对照组相比,两个共培养组中肿瘤细胞的p-Akt、p-STAT3、cyclin D1和MMP9蛋白质水平均明显上调(P<0.05),而p-ERK1/2仅在前脂肪细胞共培养组中上调(P<0.001),在成熟脂肪细胞共培养组中没有明显变化。和共培养组相比,瘦素中和抗体处理后可以抑制肿瘤细胞中瘦素下游信号通路的激活。该研究表明,前脂肪细胞和成熟脂肪细胞均能促进乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和迁移,且这一促进作用和瘦素信号通路有关。
- 王婷王晋蜀张志慧姜亚运夏菁苟理尧刘梦瑶张彦
- 关键词：瘦素脂肪细胞乳腺癌细胞迁移
