张利涛
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 供职机构：华南理工大学生物科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 肝脏特异性表达载体的构建及Western blotting检测被引量：1
- 2011年
- 研究靶向于肝细胞的组织特异性siRNA,实现siRNA基因治疗的组织特异性,可用于特异性治疗乙肝,突破RNA干扰技术在临床应用的一大障碍。用靶向于EGFP的siRNA(以下简称siEGFP)替代靶向于乙肝病毒保守区的siRNA,构建可以在肝细胞中特异性表达的载体,用来表达siRNA。将目标载体分别转染肝癌细胞HepG2、乳腺癌细胞MDB-MB-231、人胚肾细胞293,在蛋白质水平上检验siRNA抑制的组织特异性。Western blotting结果证实,siEGFP在肝组织来源的细胞系HepG2中抑制效率明显高于其他两组细胞。构建的载体可以在肝癌细胞系中特异性的表达siRNA,而在其他组织细胞中不表达,实现了组织特异性。进一步将siEGFP替换为抑制HBV表达的siRNA,同样可以实现肝脏特异性的表达。
- 张利涛刘慧琳曹以诚
- 关键词：RNAIEGFPWESTERNBLOTTING
- 肝脏特异性siRNA的研究
- 目的研究靶向于肝细胞的组织特异性siRNA,实现siRNA基因治疗的组织特异性,可用于特异性治疗乙肝,突破RNA干扰技术在临床应用的一大障碍。方法为了以后的动物实验,用靶向于EGFP的siRNA(以下简称siEGFP)替...
- 张利涛
- 关键词：RNAI特异性SIRNAEGFPWESTERN-BLOT
- 文献传递
- 肝脏特异性基因疫苗研究
- 2010年
- 本研究构建了肝脏特异性表达的载体,为进一步构建肝脏特异性的siRNA载体做前期准备。通过PCR方法扩增得到人Alpha-1抗胰蛋白酶(human-α1-anti-Trypsin)启动子片段(以下简称hAAT启动子)。回收纯化后克隆到pCDNA6载体中,同时以EGFP作为标记蛋白。将构建好的载体分别转染到肝癌细胞HePG2、乳腺癌细胞MDA-MB-231和肺癌细胞A549中,验证其在肝脏中特异性表达的能力。然后在荧光显微镜下观察。结果表明:载体在肝癌细胞中能很好的表达EGFP,在肺癌细胞A549、乳腺癌细胞MDA-MB-231中不表达EGFP。说明采用human-α1-anti-Trypsin启动子可以实现目的基因在肝癌细胞中特异性表达,这项研究应用于抗肝癌、肝炎的siRNA基因治疗,将有利于显著提高治疗效果,减少对身体的副作用。
- 张利涛刘慧琳曹以诚
- 关键词：特异性表达HEPG2EGFP
