刘家书
- 作品数：4 被引量：2H指数：1
- 供职机构：湖北大学更多>>
- 发文基金：武汉市科技计划项目湖北省教育厅科学技术研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：文化科学轻工技术与工程生物学环境科学与工程更多>>
- 碳水化合物结合域对木聚糖酶酶学性质的影响被引量：1
- 2024年
- 【目的】旨在探究不同来源碳水化合物结合域(CBM)对山毛榉木聚糖的结合能力,并将具有较高结合能力的外源CBM融合到链霉菌L10904木聚糖酶(XYN)的C端和N端,以探究外源CBM对木聚糖酶酶学性质的影响。【方法】通过底物吸附方法,利用考马斯亮蓝G250法检测溶液中CBM在吸附前后的浓度,计算CBM的底物结合率,筛选到了结合木聚糖能力较好的CBM1和CBM4。为了探究对底物结合能力高的CBM融合位置对木聚糖酶酶学性质的影响,将CBM1和CBM4通过柔性连接肽分别与XYN的C端和N端融合,并在大肠杆菌中表达获得4种重组酶,分别命名为CBM1-XYN、XYN-CBM1、CBM4-XYN和XYN-CBM4。【结果】CBM1和CBM4与木聚糖结合率分别为89%和95%。在60℃,pH 7.0反应条件下,XYN、CBM1-XYN、XYN-CBM1、CBM4-XYN和XYN-CBM4的比活力分别是32 274.81、49 342.21、602.48、230.42和2 362.24 U/mg,CBM1-XYN比活力较XYN比活力提高了1.5倍。酶学性质分析表明,CBM1使XYN温度稳定性和pH稳定性得到了提高,将XYN和CBM1-XYN分别在60℃孵育1 h,CBM1-XYN残余酶活力和XYN残余酶活力分别为81%和28%;在pH 3-11范围内,CBM1-XYN在4℃孵育12 h后能够保持90%以上的酶活力。【结论】在大肠杆菌中成功异源表达了链霉菌来源的木聚糖酶,筛选到了对底物结合率高的两种CBM1和CBM4,并通过蛋白质融合技术成功将CBM融合到XYN上,获得酶学性质得到改良的CBM1-XYN,能够提高木聚糖酶的温度稳定性、pH耐受性及比酶活。
- 蒋文萍冉秋萍刘家书张慧敏张迪江正兵江正兵
- 关键词：木聚糖酶融合蛋白可溶性表达比活力温度稳定性
- 基于定向进化提高漆酶的催化活性及其在造纸制浆中的应用被引量：1
- 2025年
- 在造纸工业中,漆酶作为一种生物催化剂,已经被广泛研究和应用。然而,天然漆酶在工业应用中存在着催化效率低、稳定性差等问题,限制了其在制浆工艺中的应用。为了进一步开发出酶活性高,耐受性强的漆酶,本研究对短小芽孢杆菌属来源漆酶进行定向进化改造,利用高通量筛选方法从随机突变体文库中筛选得到突变体F282L/F306L、Q275P,其比酶活分别为280.87 U/mg、453.94 U/mg,是野生型漆酶的1.42倍、2.30倍;突变体Q275P的温度稳定性有明显提升,其在40、50、70℃孵育4 h后的剩余酶活与野生型漆酶相比均提高了20%以上;突变体F282L/F306L和Q275P相较野生型漆酶对多种金属离子和有机溶剂的耐受性增强。野生型漆酶的Km值为374.97μmol/L,突变体F282L/F306L和Q275P的Km值分别减小至318.96μmo/L和360.71μmo/L,底物亲和性有所提高;F282L/F306L和Q275P对底物2,2′-联氨-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)二胺盐[2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS]的kcat值分别为574.00 s^(-1)、898.03 s^(-1),分别是野生型漆酶的1.1倍和1.7倍,催化效率较高。在处理纸浆应用中,突变体Q275P处理纸浆效果最好,相比于野生型漆酶,卡伯值降低了0.82,白度提高了2.00%ISO,抗张指数和裂断长分别提高7.8%和7.2%。本研究为漆酶更好地适应造纸工业环境奠定了基础。
- 倪红杨凡王磊李变霞李华南刘家书江正兵江正兵
- 关键词：漆酶生物漂白定向进化酶学特性纸浆
- 全细胞脂肪酶(菌)对SBR系统中微生物群落演替的影响
- 2014年
- 将具有油脂污水处理功能的全细胞脂肪酶(菌)制剂,直接加入到SBR系统的活性污泥中,应用PCR-DGGE技术的应用,研究该制剂对活性污泥中微生物群落演替的影响。16S rDNA DGGE图谱表明投加全细胞脂肪酶(菌)制剂72h后,菌群丰富度Rs为57%、与空白组的48%相比变化不明显,不同样品相似性系数Cs在48.1%~74.4%之间,表明投加全细胞脂肪酶(菌)对活性污泥中原核微生物群落的演替没有明显影响。18S rDNA DGGE图谱表明,投加全细胞脂肪酶(菌)制剂72 h后,菌群丰富度Rs为72%、与空白组的22%相比存在显著性的差异,不同样品相似性系数Cs在14.5%~73.7%之间,而且优势菌体也发生动态变化,表明投加全细胞脂肪酶(菌)后,对活性污泥中的真核微生物群落演替影响明显。
- 冷欢周莉刘家书李谞赵勇江正兵宋慧婷
- 关键词：活性污泥演替DGGE
- 牛凝乳酶基因在毕赤酵母中的表达
- 2014年
- 构建3株表达凝乳酶的重组毕赤酵母，通过甲醇诱导收集BMMY液体培养基上清后，通过ArimaK方法分别对其进行酶活测试并进行酶学性质分析，结果表明，GS115／pPICgK-chyl菌株诱导7d后，其酶活达到1.905 SU/mL重组凝乳酶的最适反应温度为45℃；最适反应pH为6；存pH4-7之间凝乳活性相对稳定；在50℃以下可以保持酶活，在55℃、处理50min后，丧欠60％的活性．
- 冷欢张幸刘家书赵勇李谞江正兵宋慧婷
- 关键词：巴斯德毕赤酵母基因表达
