王东阳
- 作品数：39 被引量：53H指数：3
- 供职机构：陕西师范大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金国家社会科学基金更多>>
- 相关领域：文化科学生物学医药卫生更多>>
- 携带eGFP及人endostatin-K5的嵌合腺病毒载体Ad5/11的构建及其体外实验研究被引量：2
- 2011年
- 目的:构建携带报告基因eGFP及人内皮他丁en-dostatin-K5的嵌合型腺病毒载体Ad5/11。方法:采用重叠PCR及在细菌E.coli.BJ5183中同源重组的方法,获得表达eGFP报告基因的嵌合腺病毒骨架载体,然后以经PacI线性化的嵌合腺病毒载体骨架与PacI线性化的表达endostatin-K5的腺病毒E1穿梭载体共转染真核细胞HEK293细胞中获得携带报告基因eGFP及人endostatin-K5的嵌合型腺病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP。以获得的嵌合型腺病毒载体感染U87MG细胞,在荧光显微镜观察eGFP的表达,采用RT-PCR检测endostatin-K5的表达;将所构建的嵌合病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP与未经修饰的腺病毒载体Ad5-E1-CMV-eGFP在体外感染人胶质瘤细胞系A172及乳腺癌细胞系MDA-MB-231;通过荧光蛋白eG-FP的表达,比较它们对以上肿瘤细胞的感染效率。结果:嵌合病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP可成功地表达eGFP及endostatin-K5。以经过修饰的嵌合型腺病毒载体Ad5/11-E1-CMV-endo-K5/E3-CMV-eGFP感染人脑胶质瘤细胞系A172及人乳腺癌细胞MDA-MB-231的感染效率,明显高于对照未经修饰的腺病毒载体Ad5-E1-CMV-eGFP。结论:携带eGFP及人endostatin-K5的嵌合型腺病毒载体Ad5/11,可明显提高对人脑胶质瘤细胞系A172及人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的感染效率。
- 王东阳刘世海李星赵俊丽陈皓冯飞雪王丽娴夏海滨
- 关键词：腺病毒载体
- 小干扰RNA快速筛选的载体及其构建方法和应用
- 一种小干扰RNA快速筛选的载体，小干扰RNA快速筛选载体具有一个3.0kb的骨架载体并含有一个多克隆位点，在载体5’端的多克隆位点处存在报告基因及用于插入一个筛选靶基因表达元件的多克隆位点，其下游存在两个相反方向的任意两...
- 夏海滨边晔王东阳孙晓聪冯真真李婧郑晓晶
- 文献传递
- 经嵌合纤维蛋白Ad5/35修饰的双表达hIL-12和hIFN-α2a新型腺病毒载体的构建及体外实验研究
- 2013年
- 目的:构建经嵌合纤维蛋白Ad5/35修饰的双表达hIL-12和hIFN-α2a的新型腺病毒载体并进行体外实验研究。方法:采用常规基因克隆和同源重组技术,构建在E3区携带hIL-12B(p40)和在纤维蛋白及E4区之间携带hIFN-α2a及eGFP表达框的经嵌合纤维蛋白Ad5/35修饰的嵌合型腺病毒骨架质粒载体pAd5/35-Backbone.E3-CMV-hIL-12B(p40)/E4-hIFN-α2a-eGFP。此外,采用分子克隆手段构建携带hIL-12A(p35)的腺病毒E1穿梭载体pAd5-E1-CMV-hIL-12A(p35)。PCR法鉴定腺病毒骨架载体及穿梭载体质粒。将上述所获得的两种质粒载体经过PacI线性化后共转染HEK293细胞包装新型病毒载体。将纯化的腺病毒感染人恶性胶质瘤细胞U87MG,48小时后,荧光显微镜下观察报告基因eGFP的表达,RT-PCR检测hIL-12及hIFN-α2a目的基因的表达。结果:PCR法检测到所构建的腺病毒骨架载体及穿梭载体质粒成功携带所需的目的基因。成功包装并纯化获得新型腺病毒载体pAd5/35.E1-CMV-hIL-12A(p35)/E3-CMV-hIL-12B(p40)/E4-hIFN-α2a-eGFP。体外感染U87MG细胞,48h后荧光显微镜下可以观察到报告基因eGFP的表达,RT-PCR可以检测到hIL-12及hIFN-α2a目的基因的表达。结论:体外实验结果表明,成功制备的经嵌合纤维蛋白Ad5/35修饰的双表达hIL-12和hIFN-α2a新型腺病毒载体,为进一步探讨其在恶性脑胶质瘤动物模型中的体内治疗研究奠定了基础。
- 赵静李星王顺娟王菲王东阳夏海滨
- 人canstatin基因重组腺病毒载体的构建及其病毒制备被引量：3
- 2008年
- 目的：利用HEK293细胞内同源重组法构建带有绿色荧光蛋白报告基因的人血管能抑素（canstatin）重组腺病毒载体,扩增并纯化重组腺病毒颗粒.方法：PCR法扩增canstatin全长基因,克隆至pGEM-T载体,经酶切和测序证实后,亚克隆到穿梭质粒pAd5-CMV中,获得穿梭质粒pAd5-CMV/canstatin.用PacI酶单独酶切穿梭质粒pAd5-CMV/canstatin和腺病毒E3区带有绿色荧光蛋白表达元件的腺病毒骨架载体,采用标准的磷酸钙方法共转染HEK293细胞.7~10d后收获细胞裂解物,在HEK293细胞中扩增,病毒颗粒经氯化铯密度梯度离心纯化后,分光光度计检测重组病毒滴度.结果：测序证实pEGM-T/canstatin基因片段与GenBank公布的can-statin基因序列一致.重组腺病毒质粒转染293细胞后24h观察到绿色荧光,病毒纯化后制备出高滴度重组腺病毒（病毒滴度为2.0×1015pt/L）.结论：成功构建了表达canstatin基因的重组腺病毒载体并制备了重组腺病毒颗粒,为研究该基因在肿瘤治疗中的作用奠定了基础.
- 齐宗利李慧瑾王东阳赵俊丽边晔冯真真蒋羽清郑晓晶夏海滨
- 关键词：腺病毒载体血管能抑素绿色荧光蛋白质类
- 表达小干扰RNA的VA1缺失的腺病毒载体的构建方法
- 一种表达小干扰RNA的VA1缺失腺病毒载体，重组腺病毒载体中VA1部分基因缺失，不能产生功能性VA1基因，插入了siRNA表达元件及报告基因。其构建方法为：构建VA1缺失的穿梭载体，用VA1缺失的穿梭载体与腺病毒载体骨架...
- 夏海滨张伟锋郑晓晶赵俊丽王东阳
- 文献传递
- 一种新的PGRN结合蛋白-FAM76B蛋白的功能研究
- 颗粒蛋白前体(Progranulin,PGRN)是一种分泌性的糖蛋白,由593个氨基酸组成,成熟的经过糖基化修饰的蛋白分子量约为88kD,而非糖基化的蛋白分子量大约为68kD。PGRN蛋白包含N端17个氨基酸组成的分泌信...
- 王东阳
- 关键词：巨噬细胞炎症反应细胞凋亡
- 一种高效表达小干扰RNA载体的构建研究被引量：2
- 2007年
- 目的:用mir30前体骨架来构建高效表达小干扰RNA载体。方法:通过基因合成的方法,将mir30前体骨架进行全长基因合成,并在合成的mir30前体骨架中引入合适的酶切位点用于外源发夹DNA的克隆,然后将之克隆到含U6启动子的表达载体中。将针对绿色荧光蛋白(greenfluo-rescent protein,GFP)的小干扰RNA克隆到以上表达载体中,通过转染及Western blot来检测新的小干扰RNA表达载体的基因沉默效率。结果:同目前常用的含polIII的小干扰RNA表达载体相比较,用mir30前体骨架表达针对GFP的小干扰RNA的表达载体可以明显抑制GFP的表达。结论:用mir30前体骨架构建的小干扰RNA表达载体可高效表达外源小干扰RNA。
- 李慧瑾郑晓晶张伟锋边晔王东阳赵俊丽夏海滨
- 关键词：小干扰RNA基因沉默微小RNA
- 肿瘤特异嵌合启动子及其构建方法和应用
- 一种肿瘤特异嵌合启动子，由具有核苷酸序列表中NO1所示的碱基序列中1-233位的任何碱基的肿瘤特异启动子Survivin序列与具有核苷酸序列表中NO2所示的碱基序列中1-62位的任何碱基的miniCMV序列组成，其肿瘤特...
- 夏海滨张伟锋王东阳郑晓晶赵俊丽
- 文献传递
- 新型冠状病毒肺炎疫情下我国家庭体育发展的契机与路径被引量：16
- 2020年
- 基于新型冠状病毒肺炎疫情影响和我国家庭体育发展的需求,以探讨疫情防控中我国家庭体育发展的形势契机、潜在价值、使命担当与发展路径,为取得疫情防控攻坚战的胜利和我国家庭体育的发展等提供参考与建言。研究认为:新型冠状病毒肺炎疫情唤醒了人们的生命健康意识、激发了体育参与热情、丰富了家庭体育环境和打通了体育协作壁垒是我国家庭体育发展的契机;维系生命安全、补充学-社体育、巩固全民健康和维护公共安全是我国家庭体育发展的价值;为生命安全保驾、为学校体育协作、为全民健康助力和为社会和谐护航是我国家庭体育发展的使命;树立正确的家庭体育意识观念、发挥政府的宣传与协调能力、保护潜在的家庭体育环境资源和制定长期的家庭体育防疫机制是我国家庭体育发展的路径。
- 雷正方杨成波周奕张瑛秋王东阳曹犇水祎舟
- 关键词：家庭体育学校体育
- 传统抗阻与末端释放训练对网球发球表现的不同PAP效应被引量：4
- 2019年
- 分别了解末端释放训练和不同负荷强度的传统抗阻训练对高水平男子网球运动员平击发球速度与准确性的后激活增强效应及其最佳时间节点的变化。以7名高水平男子网球运动员为实验对象,采用4×6混合实验设计,利用手持式雷达测速仪与记录表分别对对照组、实验组的Pre与Post3、6、9、12、15 min时间节点上的平击发球速度与准确性进行科学验证与监测分析。结果发现:(1)对照组在12、15 min时间节点上的发球速度与Pre相比存在显著性差异(P<0.05),在12 min节点上的发球准确性与Pre相比也存在显著性差异(P<0.05);(2)末端释放训练组的发球速度在6 min节点达到了峰值,9 min后逐渐下降,3、6、9、12 min时间点均与Pre相比存在非常显著性差异(P<0.01),15 min节点上的发球准确性达到了峰值,与Pre相比存在非常显著性差异(P<0.01);(3)30%1RM传统抗阻组的发球速度在6 min节点达到最高值,之后保持平稳变化,在15 min时达最低点,6、9 min与Pre相比存在显著性差异(P<0.05),6 min与3 min比较存在显著性差异(P<0.05);6个时间节点上的发球准确性呈波浪式变化特征,在12 min时达到了峰值,其中,6 min节点的发球准确性与3 min相比存在非常显著性差异(P<0.01),12 min与Pre相比也存在非常显著性差异(P<0.01);(4)80%1RM传统抗阻组发球速度在3 min节点最低,然后缓慢上升,并在12 min时达到了峰值,9、12、15 min与Pro相比较存在非常显著性差异(P<0.01),发球准确性在6 min达到峰值,与Pre相比存在非常显著性差异(P<0.01);(5)在3 min和6 min节点上末端释放训练组发球速度与对照组相比存在非常显著性差异(P<0.01),80%1RM传统抗阻组发球准确性在12 min节点与对照组比较存在显著性差异(P<0.05)。末端释放训练明显提高了高水平男子网球运动员3 min、6 min和9 min时间节点上的一发球速,其中在6 min节点上达到了峰值,明显早于大负荷(80%1RM)传统抗阻�
- 雷正方雷正方王东阳张瑛秋
