侯晓军
- 作品数：61 被引量：103H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院微生物流行病研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金军队医药卫生科研基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>
- 抑制2型志贺毒素活性的多肽TF1及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种抑制2型志贺毒素活性的多肽TF1及其编码基因与应用。本发明提供的多肽，命名为TF1(又名P1)，其氨基酸序列如序列表中序列1所示。该多肽P1可以做成药物以预防和/或治疗由2型志贺毒素或产2型志贺毒素的病原...
- 王慧李涛侯晓军王琴屠伟刘越男史晶蔡昆
- 人源抗狂犬病毒糖蛋白稳定型抗体精氨酸密码子突变株的构建及其在巴斯德毕赤酵母中的分泌表达被引量：2
- 2008年
- 目的:对人源抗狂犬病毒糖蛋白(GPRV)单链二硫键稳定抗体(ScdsFv)进行精氨酸密码子修饰,实现其在酵母中的分泌表达,并检测其生物学活性。方法:参照巴斯德毕赤酵母偏好密码子,对抗GPRV ScdsFv原核表达基因进行密码子修饰,并通过点基因融合技术构建ScdsFv重组酵母表达基因,连接pPIC9K构建重组表达质粒pPIC9K-ScdsFv,电转化毕赤酵母GS115,经筛选后进行甲醇诱导表达。结果:SDS-PAGE及Western blot检测到重组表达质粒在30℃经甲醇诱导表达的蛋白相对分子质量为30000;荧光抗体试验验证ScdsFv能靶向结合GPRV;MTT试验说明ScdsFv能中和狂犬病毒,具有一定的细胞保护作用。结论:重组ScdsFv在酵母系统中可以有效表达,具有较好的生物学活性。
- 蔡昆王慧史晶包士中侯晓军荫俊
- 关键词：狂犬病毒糖蛋白巴斯德毕赤酵母分泌表达
- 一种新型融合蛋白SSI、其用途及专用基因
- 本发明公开了一种融合蛋白SSI，该融合蛋白包含EHEC O157的Stx2B、Stx1B和Int281三种保护性抗原。它具有序列表中序列1所示的氨基酸序列，其编码基因具有序列表中序列2所示的核苷酸序列。该融合蛋白是将EH...
- 王慧高翔蔡昆侯晓军王琴李涛
- A型产气荚膜梭菌α毒素全基因的分子克隆与核苷酸序列分析被引量：2
- 2003年
- 应用PCR技术,从A型产气荚膜梭菌菌株NCTC64609中扩增出A型产气荚膜梭菌α毒素全基因(cpa1229基因)并将其克隆至pMD18-T载体中。经转化、IPTG/X-gal选择培养,提取质粒,PCR和EcoRI/PstI双酶切鉴定,筛选阳性重组克隆。经核苷酸序列分析证实,cpa1229基因阅读开放框架由1194bp组成。经GenBank检索对照分析,cpa1229基因序列与国外文献报道者同源性达98.3%,表明本实验所克隆的cpa1229基因即为A型产气荚膜梭菌α毒素基因。
- 林明辉荫俊王慧宋伟邢洪光侯晓军
- 关键词：A型产气荚膜梭菌Α毒素分子克隆核苷酸序列
- 志贺毒素B亚单位及其模拟表位的制备和免疫保护效应
- 2008年
- 目的:对重组表达的StxB和预测的模拟表位肽进行免疫保护效应评价。方法:用分子生物学方法构建基因工程菌,IPTG诱导表达重组StxB,经复性后进行离子交换层析纯化。同时采用生物信息学手段对StxB的表位相关参数进行分析,预测StxB可能的抗原表位。以纯化的StxB和合成的模拟表位肽免疫小鼠后攻毒,评价StxB及其模拟表位肽的免疫保护效应。结果:表达并制备了90%以上纯度重组StxB;发现p14和p17多肽易形成转角和无规卷曲的柔性区段,可及性、极性和亲水性较强,是可能的抗原表位。免疫保护试验显示,经重组StxB和合成多肽免疫的小鼠发病延迟,症状减轻,存活率显著提高。结论:重组StxB和预测的模拟表位肽具有良好的免疫保护效果,为亚单位疫苗及其作用机制的研究奠定了基础。
- 包士中史晶蔡昆侯晓军高翔刘昊荫俊王慧
- 关键词：模拟表位
- 幽门螺旋杆菌ureB、vacA基因的原核表达产物及其与感染病人血清的免疫反应性
- 2008年
- 目的在大肠杆菌中重组表达幽门螺旋杆菌UreB、VacA蛋白,并对目的产物与感染病人血清的反应性进行验证。方法PCR扩增获得ureB、vacA基因,分子生物学方法将基因片段克隆入pET22b(+)表达载体并在大肠杆菌中诱导表达,表达产物经Ni离子亲和层析进行纯化,纯化产物采用Western Blot方法鉴定其与感染病人血清的免疫反应性。结果构建的重组大肠杆菌高效表达UreB、VacA蛋白,Ni离子亲和层析后获得90%以上纯度的目的蛋白,与感染病人血清具有良好的免疫反应性。结论重组UreB、VacA蛋白可作为幽门螺旋杆菌感染检测的候选分子。
- 包士中史晶蔡昆侯晓军荫俊王慧
- 关键词：尿素酶B亚单位空泡毒素免疫反应性
- 肠出血性大肠杆菌转移紧密黏附素受体的表达及其活性鉴定
- 2010年
- 目的:在原核表达基因工程菌中实现肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7转移紧密黏附素受体(Translocated Intim in Receptor,Tir)蛋白的高效表达,并对其活性进行初步鉴定。方法:采用PCR方法从EHEC O157:H7基因组中调取tir基因,插入pEASY-T1克隆载体。克隆质粒测序鉴定后,采用NdeⅠ、XhoⅠ限制性核酸内切酶双酶切pEASY-T1-tir质粒获得tir基因,连接同样经过双酶切的pET-22b(+)。表达质粒转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测相对分子质量,Western blotting验证抗原活性。荧光显微镜观察蛋白是否具有嵌入细胞膜的活性。结果:PCR扩增得到1686bp的目的片段。构建的原核表达质粒pET-22b(+)-tir经酶切鉴定及测序与预期序列一致。目的蛋白以裂解上清形式表达,表达量约3mg/ml。经镍柱纯化后纯度达90%以上。重组表达的Tir具有嵌入细胞膜的生物学功能。结论:成功表达了具有生物活性的重组Tir蛋白,为Tir的功能研究奠定基础。
- 肖乐王琴蔡昆屠伟侯晓军李涛王慧
- 关键词：肠出血性大肠杆菌TIR活性鉴定
- 抗轮状病毒免疫球蛋白组合物及其制备方法和用途
- 本发明涉及抗轮状病毒免疫球蛋白组合物及其制备方法和治疗轮状病毒腹泻的用途。该组合物为肠溶剂，包含有效量的抗轮状病毒特异性免疫球蛋白和药学上可接受的载体，其中的免疫球蛋白采用无特定病原体鸡，经强化免疫后获得。该组合物可用于...
- 荫俊王效义张松乐侯晓军王忠泽宋伟
- 文献传递
- 破伤风毒素保护性抗原在毕氏酵母中的分泌表达被引量：4
- 2004年
- 采用PCR方法,从C.Tetani 64008菌株中扩增大小为1353 bp的破伤风毒素与靶细胞起结合作用的重链C端基因(Tetc),直接连接pGEM-T载体进行测序,并以pPIC9K为表达载体构建重组表达质粒,经线形化的重组质粒电转化毕氏酵母细胞GS115和KM71,甲醇诱导获得了分泌表达,表达产物存在于培养上清中,占分泌蛋白的10％。通过免疫印迹可以检测到重组表达产物。活性测定表明,重组蛋白具特异结合活性。本研究通过实现破伤风毒素保护性抗原在酵母系统中的分泌表达。研究其影响因素,为其它细菌毒素蛋白高效可溶性表达,及进一步抗原片段介导保护性免疫研究及抗毒素制备奠定了基础。
- 王慧荫俊侯晓军邢洪光
- 关键词：破伤风毒素保护性抗原毕氏酵母基因表达分泌表达
- 肠出血性大肠杆菌紧密黏附素保护性多肽的表达与免疫原性分析被引量：1
- 2008年
- 目的:在基因工程菌中实现肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7紧密黏附素(intimin)保护性片段(Int281)的高效表达,并进行抗原性的初步分析。方法:应用PCR从EHEC O157∶H7基因组中钓取int281基因,插入pMD18-T克隆载体。克隆质粒测序鉴定后,采用NdeⅠ、NotⅠ限制性核酸内切酶双酶切pMD18-T-int281质粒获得int281基因,连接同样经过双酶切的pET-22b(+)。表达质粒测序鉴定后转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,经SDS-PAGE检测相对分子质量和Western印迹验证免疫学活性后,重组Int281蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA检测鼠血清抗体效价。结果:PCR扩增得到843 bp的目的片段。构建的原核表达质粒pET-22b(+)-int281经酶切鉴定及测序与预期序列一致。目的蛋白以包涵体形式表达,表达量约25%。变性复性后经镍柱纯化后纯度达95%以上。免疫印迹检测显示,重组Int281片段可以特异性地识别抗O157∶H7多抗。免疫小鼠抗体效价达1∶106。结论:重组Int281具有良好的免疫原性,为制备相应的抗体及研究其对EHEC O157∶H7黏附定植的被动保护效果奠定了基础。
- 高翔包士中史晶蔡昆刘昊侯晓军王慧
- 关键词：肠出血性大肠杆菌免疫原性
