杜德伟
- 作品数：124 被引量：399H指数：11
- 供职机构：吉林工商学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金陕西省自然科学基金中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学文化科学更多>>
- HRE/CMV启动子的克隆和缺氧调控活性的测定
- 2007年
- 目的:将具有缺氧调控作用的多种缺氧反应元件(HRE)与CMV启动子组合,以获得缺氧应答启动子。将荧光素酶报告基因置于缺氧应答启动子的下游,通过检测荧光素酶活性的方法,方便地研究缺氧应答启动子缺氧诱导的作用。方法:合成多种HRE核苷酸序列,并设立HRE突变对照,克隆入pCI-neo中,构建HRE/CMV启动子。扩增HRE/CMV序列,定向亚克隆入pGL3-Basic中,获得HRE/CMV荧光素酶报告载体。瞬时转染HeLa细胞,在0.1%O2环境下培养细胞,并设立正常氧分压环境对照。检测荧光素酶的相对活性。结果:成功构建了HRE/CMV荧光素酶报告载体,其中mPGK-HRE/CMV载体表现出很好的缺氧诱导作用和高水平的表达。结论:mPGK-HRE/CMV启动子能够有效地进行缺氧诱导和调控工作。
- 杨洁杜德伟李占亭贾林涛赵晶许彦鸣杨安钢孙脊峰
- 关键词：缺氧反应元件荧光素酶
- HCV胞膜蛋白E2基因的融合表达、纯化及多克隆抗体制备
- 2005年
- 目的原核表达HCV胞膜蛋白E2,获得抗E2多克隆抗体。方法利用PCR方法从HCV基因组序列中扩增出831bp(384～661aa)的E2基因片段并按读框克隆到原核表达载体pET32a(+),IPTG诱导HCVE2蛋白表达,SDS-PAGE和WesternBlot法检测蛋白表达,Ni-NTA偶联的琼脂糖吸附柱纯化融合蛋白,薄层扫描及Bradford法检测纯化蛋白的纯度>90%;用表达的E2蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,利用间接ELISA法检测抗体效价,WesternBlot法检测抗体特异性。结果用原核诱导表达出HCV胞膜蛋白E2免疫新西兰兔后获得多克隆抗体的效价在1∶1280以上,能特异性识别E2蛋白。结论成功构建HCVE2基因的原核表达载体,利用原核表达HCV胞膜蛋白E2制备的多克隆抗体能特异性识别E2蛋白。为进一步开展HCVE2蛋白功能和HCV受体的研究奠定了基础。
- 杜德伟孙脊峰杨洁贾战生秦鸿雁周永兴韩骅
- 关键词：肝炎病毒金属螯合亲和层析多克隆抗体
- 缺氧调控载体功能活性的研究被引量：1
- 2007年
- 目的构建具有缺氧调控活性的基因治疗载体,其表达可由缺氧选择性诱导,用于转导基因的可控性表达。方法合成各种缺氧应答基因的缺氧应答元件（HRE）寡核苷酸序列,与巨细胞病毒（CMV）启动子组合,驱动荧光素酶报告基因和治疗基因人红细胞生成素（hEPO）的转录。检测荧光素酶的活性和hEPO的表达以确定其缺氧转录活性。结果在各种缺氧调控载体中,由鼠磷酸甘油酸激酶（mPGK）的HRE与CMV启动子组合而成的缺氧应答启动子显示出高缺氧应答性,而且缺氧诱导的表达水平与完整的CMV启动子在常氧环境下的转录水平相近。结论3HRE/mPGK/CMV缺氧调控载体对于实现治疗基因的精确调控表达可能非常有用。
- 杨洁张翔陈锐杜德伟李占亭赵晶杨安钢孙脊峰
- 关键词：转录荧光素酶报告基因
- 简便易行测饲料粗脂肪含量
- 2000年
- 论述了用石油醚代替乙醚、加热套代替水浴锅测定粗脂肪含量的方法可行性。
- 杜德伟屈丽红杨敏
- 关键词：石油醚粗脂肪含量饲料
- CD81介导丙型肝炎病毒入胞作用的研究
- 2006年
- 丙型肝炎病毒（HCV）感染呈全球分布，全世界约有1．7亿HCV感染者，占世界人口的3％，是人类免疫缺陷病毒-1感染者的5倍。约70％HCV感染者转化为慢性，并与肝硬化、肝衰竭和肝癌的发生密切相关。迄今为止，对于HCV的嗜肝性尚无合理解释，参与HCV识别、黏附及入胞的肝细胞表面分子还不完全清楚。CD81属于四次跨膜超家族成员，能够与HCV包膜糖蛋白E2结合，有学者认为其可能是HCV的特异性受体。为验证CD81介导HCV包膜蛋白及HCV颗粒入胞能力，我们构建含人CD81基因及HCV包膜蛋白E2661与人IgG1-hcγ1融合蛋白的真核表达载体并进行真核表达。将HCV包膜蛋白或HCV阳性血清与稳定表达CD81的细胞株共同孵育，检测细胞内HCV包膜蛋白及HCV的mRNA，观察了CD81介导HCV包膜蛋白及HCV颗粒入胞能力。
- 贾战生杜德伟刘秋平王春雨秦鸿雁魏欣赵甫涛李光玉韩骅
- 关键词：包膜糖蛋白
- 浅谈高职高专如何开展创新教育实现教育创新
- 2003年
- 就教育观念、教育目标、教学过程、教育教学评价体系和评价方法、教师素质和要求、教育教学管理体制六个方面论述了高职高专院校应如何开展创新教育的浅显认识。
- 杜德伟李凤祥
- 关键词：高专教育目标教学管理体制教师素质
- IL-12的真核表达载体增强小鼠对DNA疫苗的免疫应答被引量：3
- 2000年
- 杜德伟周永兴冯志华姚志强
- 关键词：基因疫苗乙型肝炎表面抗原IL-12
- 吉林省高校发展态势及对策研究
- 2011年
- 本文论述了吉林省高等学校发展现状、院校的特色、存在的问题和今后的发展态势,并就新升格的吉林工商学院进行了剖析,提出了发展对策。
- 杜德伟
- 关键词：高等教育
- 人CD81真核表达载体的构建及在COS-7细胞中的表达
- 2004年
- 目的:构建含人CD81基因的真核表达载体,探讨CD81在COS-7细胞的表达,为研究丙型肝炎病毒(HCV)与CD81 相互作用奠定基础. 方法:从我们构建的含人CD81全编码基因载体pMD18-T- CD81,应用双酶切回收基因片段,定向克隆入真核表达载体pVAXl;通过脂质体介导的基因转染技术将pVAXl- CD81和空载体转入COS-7细胞;应用抗CD81单克隆抗体通过间接免疫荧光法检测COS-7细胞的表达产物. 结果:重组的含CD81基因的真核表达载体pVAXl-CD81 经酶切和PCR鉴定分析正确,并证明在COS-7细胞表面有效地表达CD81蛋白. 结论:成功构建含CD81全编码基因的真核表达载体pVAXl-CD81,并在COS-7细胞表面有效表达CD81分子, 该转染细胞可作为研究CD81在HCV感染中的作用提供模型.
- 刘秋平贾战生杜德伟李光玉潘蕾魏欣罗新栋王全楚
- 关键词：真核表达载体COS-7细胞间接免疫荧光法包膜糖蛋白慢性肝脏疾病
- 白细胞介素12真核表达载体对DNA疫苗诱导免疫应答的影响
- 2000年
- 目的 :观察白细胞介素 12真核表达载体 (pWRG316 9)对HBV -SDNA疫苗 (pCR3.1-S)诱导Balb/c小鼠 (H - 2d)的特异性细胞免疫应答及其对稳定表达HBsAg的小鼠肥大细胞瘤P815细胞 (P815 -HBV -S)成瘤性的影响。方法 :肌肉注射DNA疫苗及白细胞介素 12真核表达载体 ,背部皮下接种P815 -HBV -S细胞 ,观察成瘤情况 ,4h51Cr释放法检测小鼠脾细胞CTL活性。结果 :对照组成瘤率 10 0 % ,pCR3·1-S组小鼠成瘤率为 12 .5 % ,pCR3·1-S +IL - 12真核表达载体组成瘤率为 0 ,对照组平均存活期和 6周后存活率分别为 2 8.4d和 0。后两组分别大于 38.2d及 45d ,存活率为 87.5 %及 10 0 % ,pCR3·1-S组CTL细胞杀伤活性 5 1.1% ,联合白细胞介素 12真核表达载体组 72 .6 % ,对照组为 2 0 .5 % (P <0 .0 1)。结论 :DNA疫苗可以诱导小鼠细胞免疫应答 ,对体内HBV感染具有预防及治疗作用。白细胞介素
- 杜德伟周永兴冯志华李光玉姚志强
- 关键词：免疫应答DNA疫苗白细胞介素12乙型肝炎
