李桂新
- 作品数：34 被引量：233H指数：9
- 供职机构：浙江大学更多>>
- 发文基金：国家杰出青年科学基金国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学更多>>
- 一种检测多种转基因标记的RPA引物组和可视化检测体系及检测方法
- 本发明属于分子生物学检测技术领域，具体涉及一种检测多种转基因标记的RPA引物组和可视化检测体系及检测方法。本发明提供了针对转基因标记CaMV35S、NptII和/或Hyg设计得到的RPA引物对，可分别进行单重RPA检测、...
- 颜晶莹李桂新倪亮 沈星宇 王肖肖李坤峰 李玉
- 黄瓜花叶病毒2a基因上的两个氨基酸共同决定其在豆科植物上引发的过敏反应被引量：9
- 2002年
- 过敏反应（hypersensitive response,HR）是植物对病原物侵染的一种抗性反应.对黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）在豆科植物上引发HR反应的相关因子进行了研究,证明CMV 2a基因中的243个碱基决定了过敏反应.进一步对该区域进行了分析和点突变研究,用豆科系统侵染株系CMV-P1的631位氨基酸酪氨酸（Tyr）替换豆科局部坏死株系CMV-Fny的相应位点氨基酸苯丙氨酸（Phe）后得到的突变体（Fny-F/Y）在豆科植物上引发HR反应,但过敏枯斑能够向外扩展;用CMV-P1的641位氨基酸丝氨酸（Ser）替换CMV-Fny的相应位点氨基酸丙氨酸（Ala）得到的突变体（Fny-A/S）在豆科植物上引发的HR反应与CMV-Fny引发的症状没有差异;当这两个位点同时被置换后得到的突变体（Fny-FA/YS）在豆科植物接种叶上就不再引发HR反应,而是产生系统侵染,说明CMV在豆科植物上引发的过敏反应是由CMV 2α基因上的631和641位氨基酸共同决定的.
- 陶小荣周雪平李桂新于嘉林
- 关键词：氨基酸过敏反应黄瓜花叶病毒复制酶基因豆科植物
- 综合性实验的界定与作用探析被引量：59
- 2008年
- 综合性实验已有了明确的定义，但定义的可操作性较差。该文对综合性实验的实质做了剖析，提出在重视综合性实验的同时，更要重视内容体系和教学方法的改革。
- 肖建富高瞻李桂新
- 关键词：实验教学
- 烟草曲茎病毒复制相关蛋白基因原核表达条件优化被引量：21
- 2007年
- 为了提高烟草曲茎病毒(Tobacco curly shoot virus,TbCSV)复制相关蛋白(replication-associated protein,Rep)基因在大肠杆菌中表达量,研究了大肠杆菌菌株、温度、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对GST-Rep融合蛋白表达量的影响.结果表明,大肠杆菌菌株Rosetta在37℃培养3h后,使用终浓度为0.5mmol·L-1的IPTG在28℃诱导培养4h时,GST-Rep融合蛋白表达量最高,表达的GST-Rep融合蛋白可占细菌总蛋白的42%以上.用GST-Sepharose 4B亲和层析柱对GST-Rep融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE表明GST-Rep融合蛋白大小约为66kD,与预计的分子量大小一致,Western blot分析表明其能与GST多克隆抗体起特异性反应.Rep基因的优化表达为研究该基因的作用机理打下了基础.
- 潘滨吴建祥李桂新周雪平
- 关键词：原核表达
- 一种新型植物DNA病毒载体及其用途
- 本发明公开了一种新型植物DNA病毒载体及其用途。本发明提供的植物DNA病毒载体包括中国番茄黄化曲叶病毒DNA－A和DNAβ的侵染性载体及由它衍生的植物基因沉默载体和病毒表达载体。本发明还提供了一种新型的构建植物DNA病毒...
- 周雪平陶小荣谢艳李正和李桂新
- 文献传递
- dsRNA介导的植物抗病毒基因工程的方法
- 本发明涉及一种dsRNA介导的植物抗病毒基因工程的方法。本发明通过RT－PCR获取目标病毒基因组中某一基因的全长或部分核苷酸序列的cDNA，并分别插入到含有内含子的pBlue SK的两端，构建该基因片段的反向重复，继而将...
- 周雪平牛颜冰陶小荣张凯李桂新吴建祥
- 文献传递
- 玉米矮花叶病毒研究进展被引量：16
- 2002年
- 玉米矮花叶病毒 (Maizedwarfmosaicvirus,MDMV)是在世界范围内广泛分布的重要病毒 ,文中从寄主范围、传播、株系状况、分子生物学及检测等方面 ,对MDMV的国内外研究现状进行了阐述。
- 蒋军喜李桂新周雪平
- 关键词：玉米矮花叶病毒株系分子生物学
- 负调控PICKs基因在降低植物中植酸含量中的应用
- 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及负调控PICKs基因在降低植物中植酸含量中的应用。本发明提供了PICKs基因在降低植物中植酸含量中的应用，通过敲除植物中的PICKs基因，即敲除目的植物中的PICK1、PICK2、...
- 郑绍建徐丽霖丁忠杰李桂新
- 烟草曲茎病毒 AC4基因的原核表达与免疫定位被引量：3
- 2004年
- 利用 PCR方法从烟草曲茎病毒 ( Tb CSV) Y3 5分离物的病株中获得 AC4基因 ,将其克隆到原核表达载体 p ET-3 0 a上获得重组质粒 p ET-Y3 5 AC4,重组质粒导入大肠杆菌 BL2 1 ( DE3 ) p Lys S中 ,IPTG诱导后 SDS-PAGE发现 ,AC4蛋白已在大肠杆菌中获得了表达。利用 Ni2 +-NTA亲和树脂纯化了 AC4重组蛋白 ,免疫家兔获得 AC4蛋白的多克隆抗体。利用免疫胶体金技术对感病烟草中AC4蛋白进行定位发现,TbCSV AC4蛋白主要在细胞质的叶绿体和线粒体中积累。
- 李云琴崔晓峰胡东维李桂新周雪平
- 关键词：烟草曲茎病毒原核表达
- 与烟草曲叶病毒伴随的新型DNA分子鉴定被引量：24
- 2002年
- 根据已报道的两种粉虱传双生病毒DNAβ分子的保守序列设计引物,利用PCR技术从烟草曲叶病毒Y5和Y8分离物中扩增到一类环状DNAβ分子,其全长分别为1333和1338nt.序列分析表明,Y5DNAβ可能编码8个可读框（ORFs）,病毒链和互补链各含有4个ORFs;Y8 DNAβ可能编码7个ORFs,病毒链含有4个ORFs,互补链含有3个ORFs.除茎环结构TAATATTAC外,DNAβ与烟草曲叶病毒Y5和Y8基因组DNA-A序列几乎无同源性.Y5和Y8的DNAβ全长核苷酸序列同源性较高,为85％,而与已报道的胜红蓟黄脉病毒（AYVV）DNAβ及棉花曲叶病毒（CLCuV）的两个DNAβ的同源性为51％～65％.免疫捕获PCR及粉虱传毒实验表明,DNAβ分子包裹在双生病毒粒子中,并伴随病毒由烟粉虱传播.
- 谢艳周雪平李正和李桂新张仲凯
- 关键词：DNAΒ烟粉虱双生病毒
