范砚茹
- 作品数：12 被引量：8H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市教育委员会科学技术研究项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- Sh-PLCε提高IL-2治疗肾癌疗效的研究被引量：1
- 2019年
- 该实验旨在探讨磷脂酰肌醇特异性磷脂酶Cε(phospholipase Cε,PLCε)是否在白介素2(interleukin 2,IL-2)治疗肾癌的过程中发挥一定的作用。采用sh-PLCε慢病毒转染肾癌细胞株786-o。MTT法检测IL-2处理肾癌细胞最适浓度,使用最适浓度IL-2处理细胞。流式细胞术检测细胞凋亡。DAPI染色观察细胞中凋亡小体。q-PCR、Western blot检测Fas/FasL以及Fas下游相关分子在基因水平以及蛋白水平的表达变化。将肿瘤细胞与淋巴细胞进行共培养,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果显示,敲低PLCε后,Fas/FasL表达降低,而IL-2处理后,会逆转这种效果。检测Fas下游相关通路后发现,IL-2处理阴性对照(negative control,NC)组后,Fas下游凋亡抑制信号通路FADD/cFlip/Traf2启动,IL-2处理sh-PLCε组后,Fas下游凋亡信号通路FADD/Caspase8/Caspase3启动。共培养实验后流式细胞术结果显示,IL-2处理与sh-PLCε联用组细胞凋亡比例最高。该实验证明,sh-PLCε可以通过启动Fas下游凋亡信号通路,抑制凋亡抑制信号通路来提高IL-2治疗肾癌的疗效。
- 杨锦潇段李梅范佳鑫李婷范砚茹袁鸿玲吴小侯罗春丽
- 关键词：肾癌FAS/FASLIL-2免疫逃逸
- PLCε沉默后通过Wnt/β-catenin信号通路抑制比卡鲁胺耐药的前列腺癌细胞增殖被引量：3
- 2018年
- 目的:探讨磷脂酰肌醇特异性磷脂酶Cε(phosphoinositide-speci c phospholipase Cε,PLCε)对前列腺癌细胞增殖和比卡鲁胺敏感性的影响及其对Wnt/β-catenin信号通路的调控作用。方法:采用比卡鲁胺浓度递增及间歇诱导法建立对比卡鲁胺耐药的前列腺癌B-LNCAP细胞。应用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测前列腺癌LNCAP和B-LNCAP细胞中雄激素受体(androgen receptor,AR)和PLCεmRNA和蛋白的表达,CCK-8法检测LNCAP和B-LNCAP细胞对比卡鲁胺的敏感性。将干扰PLCε表达的重组慢病毒LV-shPLCε或阴性对照(negative control,NC)LV-NC感染B-LNCAP细胞(称为LVshPLCε/B-LNCAP或LV-NC/B-LNCAP),Wnt/β-catenin信号通路激活剂AZD2858处理LV-shPLCε/B-LNCAP细胞,以未进行任何干预的B-LNCAP细胞作为空白组。应用CCK-8法检测各组细胞的增殖情况及对比卡鲁胺的敏感性,应用克隆形成实验检测各组细胞的克隆形成能力,蛋白质印迹法检测各组细胞的细胞质和细胞核中β-catenin和AR蛋白表达水平,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞中c-myc、cyclin D1mRNA和蛋白表达水平。结果:B-LNCAP细胞中PLCε、AR mRNA和蛋白的表达水平均高于LNCAP细胞(P值均<0.05),B-LNCAP细胞对比卡鲁胺的耐药系数为132.87,成功构建前列腺癌耐药细胞B-LNCAP。LV-shPLCε/B-LNCAP细胞增殖和克隆形成能力均弱于空白组和LV-NC/B-LNCAP组(P值均<0.01),比卡鲁胺对LV-shPLCε/B-LNCAP细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值均低于空白组和LV-NC/B-LNCAP组(P值均<0.05),LV-shPLCε/B-LNCAP细胞核中β-catenin和AR蛋白表达水平明显低于空白组和LV-NC/B-LNCAP组(P值均<0.01),LVshPLCε/B-LNCAP细胞中c-myc、cyclin D1 mRNA和蛋白的表达水平均低于空白组和LV-NC/B-LNCAP组(P值均<0.01);AZD2858处理的LVshPLCε/B-LNCAP细胞增殖和克隆形成能力强于LV-shPLCε/B-LNCAP细胞(P值均<0.05),比卡鲁胺对AZD2858处理的LV-shPLCε/B-LNCAP细胞IC50�
- 李罗范佳鑫牛凌芳范砚茹高英英张尧罗春丽
- 关键词：前列腺肿瘤肿瘤细胞增殖WNT信号通路比卡鲁胺
- Nir-29c在膀胱癌组织中表达降低并抑制膀胱癌细胞增殖
- 第一部分MiR-29c在膀胱癌组织中表达降低 目的:miR-29c在膀胱癌组织及癌旁组织中的差异表达及其与临床各病理参数的关系。 方法:利用实时荧光定量PCR检测30例膀胱癌组织及癌旁组织中miR-29c的表达;Ta...
- 范砚茹
- 关键词：膀胱移形细胞癌临床病理增殖抑制
- Mir-29c在膀胱癌组织中表达降低并抑制膀胱癌细胞增殖
- 目的：miR-29c在膀胱癌组织及癌旁组织中的差异表达及其与临床各病理参数的关系。方法：利用实时荧光定量PCR检测30例膀胱癌组织及癌旁组织中miR-29c的表达；Ta期：5例，T1期：15例，T2-4期：10例，参照m...
- 范砚茹
- 关键词：膀胱移行细胞癌临床病理参数腺病毒膀胱移形细胞癌
- 文献传递
- shPLCε通过PPARβ/twist1抑制前列腺癌细胞的迁移和EMT过程被引量：2
- 2018年
- 该研究旨在探讨磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C epsilon(phospholipase C epsilon,PLCε)对前列腺癌细胞上皮–间充质转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及迁移能力的影响。用LV-sh PLCε感染前列腺癌细胞,q-PCR和Western blot检测PLCε、过氧化物酶体增殖物激活受体β(peroxisome proliferator activated receptorβ,PPARβ)、twist1和EMT相关分子m RNA和蛋白质水平,划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移能力。结果表明,感染LV-sh PLCε可显著下调PLCε、PPARβ和twist1的m RNA和蛋白质水平,同时降低前列腺癌细胞株PC3和DU145的迁移能力以及EMT过程。而在sh PLCε组细胞中加入PPARβ的激动剂能一定程度逆转PPARβ和twist1的下调,促进细胞的迁移能力和EMT过程;而PPARβ的抑制剂产生相反作用。该研究说明,PLCε可通过PPARβ/twist1影响前列腺癌细胞的迁移能力和EMT过程。
- 范佳鑫李罗牛凌芳范砚茹高英英吴小候罗春丽
- 关键词：前列腺癌EPSILONTWIST1EMT
- hepaCAM基因重组腺病毒质粒的构建及鉴定
- 2013年
- 目的构建表达肝细胞黏附分子(Hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM)基因的重组腺病毒质粒,并进行鉴定。方法以质粒pEGFP-N2-hepaCAM为模板,PCR扩增hepaCAM基因,克隆至腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV上,经酶切、PCR及测序鉴定正确后,将重组腺病毒穿梭质粒pAdtrack-CMV-hepaCAM经PmeⅠ线性化,转化至含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的感受态大肠杆菌BJ5183中进行同源重组。重组腺病毒质粒pAdEasy-1-hepaCAM经PmeⅠ线性化后,转染HEK-293细胞,包装重组腺病毒AdI-hepaCAM,经大量扩增后,检测病毒滴度。RT-qPCR及Westernblot检测感染的BIU-87细胞内hepaCAM的表达。结果酶切鉴定证实重组腺病毒质粒pAdEasy-1-hepaCAM构建正确,重组腺病毒AdI-hepaCAM滴度可达1.6×1012pfu/ml,与空载体腺病毒组比较,经重组腺病毒感染的BIU-87细胞中hepaCAM mRNA及蛋白的表达均明显升高(P<0.05)。结论已成功构建携带hepaCAM的重组腺病毒载体AdI-hepaCAM,为研究hepaCAM基因对膀胱癌细胞增殖的调控提供依据。
- 陶佳王秋菊范砚茹杜红飞宋学东罗春丽吴小侯
- 关键词：黏附分子腺病毒膀胱癌
- 氨基端PLCε基因的克隆、原核表达及抗血清的制备
- 2014年
- 目的通过在原核系统中表达人磷脂酶Cε(phospholipase Cε,PLCε)基因,制备兔抗PLCε的抗血清,并验证其特异性。方法应用RT-PCR从人膀胱癌细胞的cDNA中克隆出部分PLCε基因,构建重组表达载体PGEX-6P-1/PLCε,并转化大肠杆菌BL21,以IPTG诱导表达GST-PLCε融合蛋白,通过GST亲和层析系统纯化重组蛋白,超滤后免疫家兔,获得家兔抗PLCε的抗血清。采用ELISA检测抗血清效价,Western blot测定其特异性。结果 RT-PCR扩增出336 bp的PLCε基因,并成功构建重组质粒PGEX-6P-1/PLCε,质粒测序结果显示,目的基因序列与GenBank中PLCε基因序列完全一致。将纯化后的GST-PLCε蛋白免疫家兔,获得抗血清;ELISA效价1∶16 000以上;Western blot结果显示,该抗血清与原核表达的GST-PLCε融合蛋白和人膀胱癌T24细胞株表达的PLCε蛋白特异性结合。结论在原核细胞中表达了PLCε蛋白,制备了家兔抗人PLCε的抗血清,可用于相关肿瘤检测,为进一步研究PLCε蛋白功能和作用机制奠定了基础。
- 宋学东王胤杜红飞范砚茹梁勤东吴小侯罗春丽
- 关键词：原核表达抗血清制备
- 构建MicroRNA-29a和microRNA-29c腺病毒并探讨其对膀胱癌细胞增殖能力的影响被引量：1
- 2014年
- 构建miRNA-29a/c的重组腺病毒并观察其对膀胱癌T24细胞增殖能力的调控。以人全基因组DNA为模板,PCR扩增miR-29a、miR-29c,克隆至腺病毒穿梭载体pAdtrace-TO4-CMV。重组穿梭载体经pme I线性化后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1共转化感受态大肠杆菌BJ5183,通过同源重组获得重组腺病毒质粒pAdEasy-1-miR-29a、pAdEasy-1-miR-29c,pac I线性化后转染HEK-293细胞,进行包装和扩增。实时荧光定量PCR检测感染腺病毒的膀胱癌T24细胞中miR-29a、miR-29c的表达水平,并利用CCK-8实验检测细胞增殖能力。经DNA测序和限制性内切酶分析显示,重组腺病毒质粒pAdEasy-1-miR-29a、pAdEasy-1-miR-29c构建成功;感染腺病毒Ad-miR-29a和Ad-miR-29c后,经实时荧光定量PCR检测,膀胱癌细胞中miR-29a、miR-29c表达显著增高(P<0.01);过表达miR-29a/c后的CCK-8实验显示,细胞增殖能力明显低于对照组(P<0.05)。以上说明已成功构建miR-29a、miR-29c腺病毒,过表达miR-29a/c可抑制膀胱癌细胞的增殖。
- 范砚茹杜红飞宋学东罗春丽
- 关键词：MICRORNAMICRORNA腺病毒膀胱癌细胞增殖
- PLCε通过Warburg效应介导前列腺癌的转移的研究
- 目的1、PLCε和HIF-1α在前列腺癌组织及前列腺增生组织中的差异表达及其与临床各病理参数的关系;前列腺癌患者血清中HIF-1α的表达及其与临床各病理参数的关系。2、PLCε通过HIF-1α信号调节前列腺癌细胞的糖酵解...
- 范砚茹
- 关键词：介导
- 文献传递
