李坤
- 作品数：42 被引量：70H指数：5
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- 定量检测囊性纤维化跨膜传导调节因子BA-ELISA方法的建立与评价
- 2015年
- 目的：建立一种定量检测囊性纤维化跨膜传导调节因子（CFTR）的生物素-亲和素ELISA（BA-ELISA）方法并评价其可靠性。方法：优选设计CFTR三个表位的大肠杆菌表达抗原,免疫新西兰白兔获得CFTR多克隆抗体,用纯化后的抗体包被酶标板,并用生物素对其标记,从人精子提取CFTR作为抗原,用辣根过氧化物酶偶联的亲和素检测,优化两种抗体浓度及实验参数,建立可定量检测CFTR蛋白的双抗体夹心BA-ELISA方法;用临床精子标本评估所建立方法的重复性、特异性等。结果：CFTR包被抗体和生物素化CFTR抗体最适浓度分别为4μg/ml和10μg/ml,最佳封闭液为1%BSA-PBST,抗原与包被抗体最佳反应时间60 min,底物显色最佳时间15 min。批内、批间变异系数分别为2.16%~9.23%和2.29%~11.71%,包被的CFTR抗体与精子胞浆蛋白无交叉反应,最低检出下限为0.15 ng/ml,标准反应曲线具有良好的线性关系R2=0.962。结论：成功创建了定量检测CFTR蛋白的ELISA方法,具有特异性强、灵敏度高等特点。
- 邱枫曾杰李坤陈爱君徐万祥倪崖
- 精子优选新方法建立及相关调节机制研究
- 目的建立一种人精子优选方法并研究相关调节机制。方法设计制作一种新装置,利用孕酮进行条件优化,通过精子浓度检测验证方法可行性,同时检测精子优选前后的形态、DNA片段和凋亡状态以评价优选效果;进一步用特异性抑制剂格尔德霉素和...
- 李坤孙培蓓李瑞郑东旺王雅艳倪崖
- 关键词：精子辅助生殖技术孕酮HSP90磷酸化
- Adjudin抑制人精子获能和受精能力及其作用机制
- 背景Adjudin系Lonidamine衍生物。以往我们在大鼠、家兔及猎犬研究证明Adjudin是一种潜在的男性避孕药,它通过干扰睾丸支持细胞和生精细胞的粘附连接,由此引起成熟前生精上皮精子细胞释放,导致雄性不育(Mru...
- 李坤倪崖贺毅陈文颖吕建新C Yan ChengRen-shan Ge石其贤
- 关键词：避孕药人精子受精能力免疫荧光染色法
- 人免疫缺陷病毒流行毒株的脱氧核糖核酸低密度芯片基因分型检测法
- 本发明提供一种快速鉴别人类免疫缺陷病毒(HIV)流行毒株基因分型的方法，特别适宜基层普及使用的人免疫缺陷病毒流行毒株的脱氧核糖核酸低密度芯片(DNA macroarray)基因分型的检测方法。通过从HIV-1抗体阳性标本...
- 倪崖黄云坚房国坚谭卓金妙坚李坤蒋娴
- 文献传递
- 一种检测人精子活动力和化学趋向性的装置
- 本实用新型公开了一种用于检测人精子活动力和化学趋向性的装置，包括底座和与底座相配合的盖子，底座的顶面凹设有样本室、引诱室和对照室，其中，引诱室和对照室之间通过第二通道相连，样本室与第二通道的中点之间通过第一通道相连，第二...
- 李坤薛亚梅倪崖陈爱君石其贤谢海锋邱枫
- 文献传递
- 分泌型磷脂酶A2-ⅡD在人类精子获能过程中的作用
- 精子顶体反应是精子穿过卵子透明带并和卵子融合的前提.以往研究发现磷脂酶A2 (PLA2)与精子顶体反应有关.顶体反应发生时PLA2被激活，引起磷脂酰胆碱水解，产生花生四烯酸和溶血磷脂，促使精子顶体反应发生.PLA2在哺乳...
- 李坤金建远陈文颖谢海锋邱枫曾杰孙培蓓石其贤倪崖
- 关键词：顶体反应精子获能
- 一种CFTR重组蛋白及其编码基因和用途
- 本发明公开了一种CFTR重组蛋白，具有如SEQ No.1所示的氨基酸序列。本发明还公开了一种所述CFTR重组蛋白的制备方法、一种编码所述CFTR重组蛋白的基因以及含有所述基因的重组载体或转化子、一种利用所述CFTR重组蛋...
- 倪崖李坤徐万祥唐海平陈爱君石其贤孙志达
- 热休克蛋白90与人精子氧化应激相关性的初步研究被引量：3
- 2014年
- 目的探讨热休克蛋白90(HSP90)与人精子氧化应激是否相关。方法人精子标本经percoll分离处理后,分别用含0、100、200和400μmol/L H2O2的获能培养基应激刺激2h,用免疫印迹法检测和灰度分析法定量分析了不同氧化应激状态下精子HSP90表达水平,用相同方法进一步考察200μmol/L H2O2应激刺激0、0.5、1和2h后HSP90表达水平。结果不同浓度H2O2应激刺激人精子2h后,各组间HSP90表达水平具有统计学差异,400μmol/L组HSP90表达量较0μmol/L组明显降低;200μmol/L H2O2应激刺激人精子不同时间后各组间HSP90表达水平亦具有统计学差异,在0.5h时HSP90表达水平最低,后随时间延长表达水平又逐步升高。结论氧化应激时人精子HSP90表达水平可发生变化,且与活性氧浓度和应激时间相关,推测HSP90可能参与人精子氧化应激过程。
- 谢海锋李坤陈爱君倪崖
- 关键词：HSP90氧化应激精子H2O2
- GABA激活GABAA receptor/Cl-通道诱发大鼠精子获能需要HCO3-和Cl-参与
- 为了探讨 GABA 激活 GABA R/Cl 通道引起大鼠精子获能是否需要 HCO和 Cl参与, 将大鼠精子分别悬浮于完全 mRFM、缺 Cl-mRFM、无 HCO—mRFM 以及缺 Cl和无 HCO—mRFM 培养基中...
- 倪崖周晨曦陈璋辉李坤陈文颍许文明陈小章石其贤
- 关键词：GABA孕酮获能精子
- 文献传递
- 人免疫缺陷病毒流行毒株的脱氧核糖核酸低密度芯片基因分型检测法
- 本发明提供一种快速鉴别人类免疫缺陷病毒(HIV)流行毒株基因分型的方法，特别适宜基层普及使用的人免疫缺陷病毒流行毒株的脱氧核糖核酸低密度芯片(DNA macroarray)基因分型的检测方法。通过从HIV－1抗体阳性标本...
- 倪崖黄云坚房国坚谭卓金妙坚李坤蒋娴
- 文献传递
