吴娟
- 作品数：8 被引量：36H指数：4
- 供职机构：中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所更多>>
- 发文基金：云南省应用基础研究基金云南省烟草公司项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 腺病毒介导HAV结构基因表达及其产物的免疫学性质检测
- 2002年
- 目的 探讨重组腺病毒免疫实验动物后的抗体反应。方法 利用RT-PCR方法,从HAV-L8株的RNA中扩增出结构蛋白vp3+vpl基因,克隆到穿梭质粒pXCX2 NotI上。采用磷酸钙-DNA共沉淀技术,将E1缺失的复制缺陷型腺病毒载体pJM17与pXCX2-CMV-HAV共转染293细胞。结果 通过胞内同源重组,经RT-PCR、免疫荧光染色和蛋白印迹鉴定表明,获得了复制缺陷型重组腺病毒rAdHAV。纯化后的rAdHAV滴度为1×109.0TCID50/mL。昆明种小白鼠口服rAdHAV后,诱导产生了抗HAV IgG。结论 复制缺陷型腺病毒可望成为发展口服病毒疫苗的有效载体系统。
- 吴娟李嘉琦孙茂盛戴长柏
- 关键词：重组腺病毒HAV免疫反应基因表达病毒疫苗
- 烟草丛顶病毒全长序列测定及其基因组结构分析
- 1 IntroductionTobacco bushy top disease was first reported in Zimbabwe and caused severe damage to tobacco.Sin...
- 莫笑晗秦西云吴娟杨程吴建宇段玉琪李天飞陈海如
- 关键词：基因组结构
- 文献传递
- 表达HAV结构基因的重组腺病毒鉴定及细胞病变分析被引量：3
- 2003年
- 利用RT-PCR方法,从HAV-L8株的RNA中扩增出结构基因(vp3+vp1),克隆到穿梭质粒pXCX2NotI上。采用磷酸钙-DNA共沉淀技术,将腺病毒载体pJM17与pXCX2-CMV-HAV共转染293细胞。在光学显微镜下观察到明显的细胞病变(CPE);经RT-PCR、免疫荧光染色和蛋白印迹鉴定证明HAV的结构基因已插入到腺病毒基因组中;在电子显微镜下观察发现有二十面体的病毒颗粒。以上结果表明获得了重组腺病毒rAdHAV,纯化后的rAdHAV滴度为1×109.0TCID50/mL。
- 李嘉琦吴娟孙茂盛戴长柏
- 关键词：重组腺病毒细胞病变甲型肝炎病毒
- “蛋白质转导”——基因治疗的一种新方法被引量：1
- 2001年
- 吴娟李嘉琦
- 关键词：基因治疗
- 戊型肝炎病毒在人胚肺二倍体细胞KMB17等传代细胞中的繁殖被引量：10
- 2001年
- 目的探索戊型肝炎病毒(HEV)敏感细胞及体外培养条件,为HEV体外研究提供基础。方法用戊肝患者急性期阳性粪便悬液感染恒河猴进行毒种的扩增与活化,超速离心处理猴阳性粪便标本获取培养用毒种,将其接种于各种人源性细胞(包括人胚肺二倍体细胞KMB17、人肺癌细胞A549、人肝癌细胞BEL7402、人宫颈癌细胞Hela)和非人灵长类细胞(非洲绿猴肾细胞Vero),通过细胞病变观察、RT-PCR检测及免疫荧光实验来判定细胞是否对HEV敏感。结果KMB17、A549、BEL7402细胞中第一代传代7～9d出现细胞病变,11～13d脱落,传至10代仍可经正链和负链RT-PCR检测到HEV基因组正链RNA和复制的负链RNA的存在,而Hela、Vero细胞未见细胞病变,分别于2～4代后经RT-PCR不能扩增到特异片段。在KMB17细胞培养体系中经免疫荧光实验表明实验组有明显荧光着色,病毒捕获RT-PCR扩增到特异片段。结论在采用的培养条件下,KMB17、A549、BEL7402细胞对HEV敏感,而Hela、Vero细胞不敏感,本研究建立了一定代次内HEV组织培养体系。
- 乐耕耘吴娟马雁冰杜瑞娟庄俊英谢天宏李春宏戴长柏孙茂盛
- 关键词：戊型肝炎病毒RT-PCRKMB17二倍体细胞戊型肝炎
- Caspases与细胞凋亡被引量：6
- 2003年
- Caspases是一类蛋白裂解酶,在细胞内以无活性的酶原形式存在。Caspases具有半胱氨酸激活位点和底物裂解位点,当作用于胞内特异性底物后将引起细胞凋亡。Caspases的底物特异性由其裂解位点N-端的4个氨基酸残基决定,其底物裂解部位通常位于靶蛋白质一级结构中Asp残基后,数目由一个到多个不等。Caspase酶系作为细胞凋亡的中枢效应器,在细胞凋亡的启动及进程中发挥着极为重要的作用。无活性的caspases酶原主要通过上游caspseses加工机制、邻近诱导机制或偶联调节亚基机制三种方式被激活而引发细胞凋亡。细胞凋亡是细胞生命活动的基本特征之一。本文就引起凋亡的酶系和细胞凋亡的生化机理加以综述。
- 李嘉琦吴娟
- 关键词：CASPASES细胞凋亡底物特异性生化机制
- 腹腔注射重组腺病毒诱导的免疫反应被引量：8
- 2002年
- 为研究重组腺病毒接种实验动物后的免疫反应性，利用ＲＴ－Ｐ Ｃ Ｒ方法，从ＨＡＶ的ＲＮＡ中克隆了结构蛋白基因插入穿梭质粒ｐＸＣＸ２Ｎｏｔ Ｉ，通过磷酸钙－ＤＮＡ共 沉淀技术，将复制缺陷型腺病毒载体与线形化的ｐＸＣＸ２－ＣＭＶ－ＨＡＶ共转染２９３细胞。一系列检测方法证明产生了重组腺病毒ｒＡｄＨＡＶ。纯化后的ｒＡｄＨＡＶ滴度为１×１０９ＴＣＩＤ５０／ｍＬ ，腹腔注射免疫昆明种小白鼠后，可诱导产生抗ＨＡＶ ＩｇＧ和ＨＡＶ中和抗体。复制缺陷型腺病毒 可作为发展基因工程病毒疫苗载体的有效系统。
- 吴娟李嘉琦孙茂盛戴长柏
- 关键词：重组腺病毒腹腔注射免疫反应
- 烟草脉扭病毒基因组部分序列的克隆和分析被引量：8
- 2003年
- 烟草脉扭病毒(Tobacco vein distorting virus, TVDV)是引起烟草丛顶病的两种病毒之一。TVDV被归为黄症病毒科的暂定成员。应用黄症病毒科的通用引物和根据马铃薯卷叶病毒属成员核酸序列设计的简并引物,通过RT—PCR从烟草丛顶病烟株总RNA中扩增到了TVDV基因组的部分序列。序列分析获得了长度为1654 bp的序列,编码推测的TVDV复制酶基因的部分序列、外壳蛋白基因及运动蛋白基因的全部序列。根据这三个基因编码的氨基酸序列构建的分子进化树分析表明,TVDV为黄症病毒科的确定成员。根据其基因间隔区的长度特征和各ORF编码的氨基酸的分子进化分析,我们推测TVDV应当是马铃薯卷叶病毒属的一个新成员。这是TVDV的分子生物学特征的首次报道。
- 莫笑晗秦西云杨程段玉琪吴娟李天飞吴建宇陈海如
- 关键词：烟草丛顶病分子进化树
