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刘志广: 作品数：76 被引量：399H指数：11; 供职机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项浙江省医药卫生科学研究基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学更多>>

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结核分枝杆菌多位点可变数目串联重复序列分型方法标准化操作程序的建立被引量：29: 2008年; 目的建立结核分枝杆菌多位点可变数目串联重复序列分析（MLVA）的标准化方法，评价该方法的分型能力、应用价值。方法选取15个位点，采用核酸提取、PCR和琼脂糖凝胶电泳等技术，结合BioNumerics（Version5．0）软件，对中国54株结核分枝杆菌临床分离株进行分型。结果确定标准化的MLVA方法，包括细菌分离培养、核酸提取、PCR、琼脂糖凝胶电泳等实验步骤及标化参数的相关数据分析软件的使用。VNTR位点确定为ETRA、ETRB、ETRC、ETRD、ETRE、MIRU10、MIRU16、MIRU23、MIRU26、MIRU27、MIRU39、MIRU40、Mtub21、Mtub30和Mtub39。结论建立MLVA标准化技术方案，该方法操作简便，分型鉴定能力及实验室间结果可比性强，便于网络化，有利于结核病流行中追溯传染源，分析流行趋势。; 吕冰Christine Pourcel刘敬华董海燕张媛媛蒋毅刘志广赵秀芹万康林; 关键词：结核分枝杆菌

IS6110-PCR分型方法用于安徽、湖南、江苏三省结核病分子流行病学的初步研究被引量：4: 2005年; 目的了解安徽、湖南、江苏省结核分支杆菌的基因型状况及其分子流行病学规律。方法以结核分枝杆菌插入序列IS6110序列为模板,设计一对特异外向引物,建立一种结核分枝杆菌的快速分子生物学分型方法——IS6110PCR分型方法,进行三省结核病分子流行病学研究。结果根据IS6110PCR指纹图谱,191株安徽、湖南和江苏三省的结核分枝杆菌菌株可被分成6个主要的基因型(Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅳ,Ⅴ和Ⅵ),江苏省的主要基因型为I和V型,安徽省的主要基因型为III型,湖南省的主要基因型为I和II型,V型菌株全部为江苏省菌株,IV型菌株全部为湖南省菌株。结论三省之间结核分支杆菌的基因型存在明显的差异,各自存在着独立的流行菌型,其真实原因有待进一步研究。; 陈立新谭云洪王庆许卫国刘志广高源赵秀琴阳波阚晓宏万康林; 关键词：结核分枝杆菌聚合酶链反应指纹图谱分子流行病学

新疆结核分枝杆菌临床分离株Spoligotyping基因型的初步研究被引量：4: 2010年; 目的研究新疆结核分枝杆菌Spoligotyping基因分型,初步了解其基因型多态性状况及主要流行株。方法在新疆维吾尔自治区胸科医院收集一个连续时间段的结核分枝杆菌临床分离菌株,采用比例法检测进行耐药性检测、间隔寡核苷酸分型(Spoligotyp ing)方法进行分型研究。基因聚类分析采用B ioNum erics 5.0数据库软件,统计学分析采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果共收集到结核分枝杆菌临床分离菌株175株,其中对利福平、异烟肼、链霉素和乙胺丁醇全敏感115株,耐药60株(包括单耐药31株和耐多药29株)。经Spoligotyp ing分型,这些菌株可分为4个基因群49种基因型,最大的1个基因群为北京家族,占68.57%(120/175)。北京家族中,敏感菌株63.87%(76/119),耐药菌株占36.13%(43/119);非北京家族中,敏感菌株68.52%(37/54),耐药菌株占31.48%(17/54),北京家族与非北京家族的耐药率之间差异无统计学意义(P=0.551)。结论新疆结核分枝杆菌临床菌株存在明显的基因多态性,主要流行菌株为北京基因型。北京基因型与耐药性无明显相关性。; 綦迎成刘洁鱼栓民李君莲赵秀芹王泉刘志广吕冰刘中华万康林; 关键词：结核分枝杆菌基因分型北京基因型

抗结核分枝杆菌38kD抗原单克隆抗体的制备及荧光抗体检测方法的建立被引量：3: 2007年; 目的制备抗结核分枝杆菌单克隆抗体,经纯化后标记荧光素,建立直接免疫荧光法用于痰标本的结核分枝杆菌检测。方法常规方法制备单克隆抗体。ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,用免疫印迹法确认。单克隆抗体采用饱和硫酸铵粗提和SephadexG-50层析纯化。单抗纯化后采用直接法标记异硫氰酸荧光素,标记后的荧光抗体用于临床痰涂片结核分枝杆菌的检测。结果经筛选获得4株单克隆抗体杂交瘤细胞株。ELISA检测小鼠腹水单克隆抗体效价达到1∶6400—1∶12800。免疫印迹实验表明4株单抗均为抗结核分枝杆菌38kDa蛋白单抗,其中两株产生较强的免疫反应条带。采用异硫氰酸荧光素标记纯化的单抗,建立直接免疫荧光检测法,对41份结核病患者的痰标本进行检测,阳性率为90.24%,与抗酸染色法比较,直接荧光检测法敏感性显著高于抗酸染色法(P<0.05)。结论应用抗结核分枝杆菌38kDa蛋白的单克隆抗体,建立直接免疫荧光检测法,应用于临床痰标本结核分枝杆菌检测,对于辅助诊断结核病具有一定价值。; 刘志广魏云芳赵秀芹张媛媛阳波万康林; 关键词：结核分枝杆菌单克隆抗体

220株结核分枝杆菌北京临床分离株的基因分型研究被引量：17: 2008年; 目的了解结核分枝杆菌北京临床分离株的基因分型种类和特征,为结核病防治研究提供基础科学依据。评价两种分型方法在北京地区结核病分子流行病学中的应用。方法收集北京市结核分枝杆菌临床分离株,应用间隔区寡核苷酸分型(Spoligotyping)及多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)二种分型方法进行基因分型,结果聚类分析采用BioNu-merics(Version5.0)软件。结果共在北京地区收集到220株结核分枝杆菌临床分离株。采用Spoligotyping分型方法,220株菌可分为2个基因群,即北京家族(Beijing family)和非北京家族(non-Beijing family),20种基因型。其中北京家族含有202株菌,占91.82%。北京家族菌株中,典型北京家族菌株占95.05%(192/202),非典型北京家族占4.95%(10/202)。北京家族菌株的耐药率为22.55%(22/98),非北京家族菌株的耐药率为16.67%(1/6),两者间的差异无统计学意义(fisher analysis,P=0.5835>0.05)。采用MLVA分型方法,202株菌可分成5个基因群59种基因型,主要为Beijing family、China2和China3,分别占91.37%、2.73%和4.55%。结论北京地区结核分枝杆菌具有明显的基因多态性,其主要流行型为北京家族。北京家族菌株与耐药性无明显相关性。; 曹晓慧刘志广赵秀芹吕冰张媛媛万康林; 关键词：结核分枝杆菌间隔区寡核苷酸分型基因分型

结核分枝杆菌Ag85B蛋白的重组及表达被引量：3: 2009年; 目的对结核分枝杆菌Ag85B蛋白进行重组表达,初步评价其免疫反应性。方法用PCR方法得到Ag85B蛋白的编码基因,构建重组质粒,转化到大肠杆菌BL21中。经IPTG诱导表达,得到高效稳定的表达株,并用蛋白免疫印迹方法检测免疫反应性。结果获得了高效稳定的重组Ag85B的表达株,并且重组Ag85B有较好的免疫反应性。结论重组Ag85B有较好的免疫反应性,为结核病快速诊断研究及新疫苗研究提供了基础。; 吴刚吕冰孙敏赵秀芹田绿波刘志广王吉顺万康林; 关键词：结核分枝杆菌克隆表达

耐多药结核分枝杆菌对喹诺酮类药物的耐药性与gyr基因突变的初步研究被引量：5: 2011年; 目的分析耐多药结核分枝杆菌(Multiple drug-resistant tuberculosis,MDR-TB)临床分离株的gyr基因突变特点,探讨MDR-TB对喹诺酮类药物耐药产生与gyr基因突变的关系。方法采用比例法对耐多药结核临床分离菌株进行氧氟沙星的药物敏感性检测,应用DNA直接测序法检测MDR-TB的gyr基因突变情况。结果 125株MDR-TB临床分离株中,50株对喹诺酮类耐药,耐药率为40%。50株耐药菌株中,40株gyr基因发生突变:其中39株gyrA基因突变,突变率为78%,突变位点包括90,91和94位氨基酸;5株gyrB基因突变,其中4株合并gyrA基因突变,gyrB基因突变位点为500,506,534和539位氨基酸。结论 MDR-TB中的喹诺酮类药物耐药态势比较严峻,其对喹诺酮类药物耐药机制主要与gyrA基因突变有关。; 赵丽丽夏强赵秀芹刘志广万康林; 关键词：喹诺酮 GYRA基因耐多药结核分枝杆菌

结核分枝杆菌临床分离株MLVA法分型分析被引量：1: 2012年; 目的利用多位点数目可变串联重复序列技术,初步探索甘肃省结核分枝杆菌的基因型及其分布,为防治结核病提供科学依据。方法选择15个VNTR位点,设计引物,采用PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳检测,并利用BioNumerics 4.5软件进行DNA指纹图谱多态性分析。结果多位点数目可变串联重复序列(MLVA)检测显示,215株结核分枝杆菌呈现7个基因群127种基因型,分别为a、b、c、d、e、f和g基因群,其中e群74.88%(161/215)为主要流行型(spoligotyping鉴定为北京家族基因型);有抗结核治疗史患者菌株成簇率高于无抗结核治疗史患者,差异有统计学意义(χ2=3.91,P=0.046)。结论兰州地区结核分枝杆菌基因DNA指纹图谱呈现多态性,存在主要流行株,MLVA有助于为当地政府部门制定具体的结核病防治政策和公共卫生应急方案提供科学依据。; 文建强田卫花刘志广吕冰同重湘万康林杨枢敏; 关键词：结核分枝杆菌

抗结核分支杆菌相关抗原单克隆抗体的制备及荧光抗体染色方法的建立: 2005年; 目的:制备抗结核分支杆菌的特异单克隆抗体,经纯化标记荧光后,建立直接荧光抗体染色方法用于痰标本的检测.方法:采用常规方法制备单克隆抗体.分泌单克隆抗体阳性杂交瘤细胞株的筛选采用ELISA法,确认采用免疫印迹法.单克隆抗体的纯化采用饱和硫酸铵粗提,Sephadex G-50层析纯化.单抗纯化后采用透析法标记异硫氰酸荧光素,初步应用于临床痰涂片的检测. 结果:经筛选获得4株单克隆抗体杂交瘤细胞株.ELISA检测小鼠腹水单克隆抗体效价达到1:6 400～1:12 800.免疫印迹实验表明4株单抗均为抗结核杆菌 38 KD 蛋白单抗,其中两株产生较强的免疫反应条带.单抗纯化后标记异硫氰酸荧光素,建立直接荧光抗体染色方法,对41份结核病患者的痰标本进行检测,阳性率为 90.24%,与抗酸染色法比较,直接荧光抗体染色方法敏感性明显高于抗酸染色法(P<0.05).结论:制备抗结核杆菌 38 KD 蛋白的单克隆抗体,并建立直接荧光抗体染色方法,初步应用于临床痰涂片检测中,对于辅助诊断结核病具有一定价值.; 魏云芳刘志广胡桂兰万康林; 关键词：结核分支杆菌单克隆抗体

应用MLVA技术对吉林省294株结核分枝杆菌分型分析: 2010年; 目的初步探讨利用VNTR(variable number of tandemrepeat)技术对吉林省294株结核分枝杆菌分型的分布特征。方法采用多位点串联重复序列(MLVA)分型方法初步选取13个分型效果较好的VNTR基因位点,采用聚合酶链反应(PCR)和琼脂糖凝胶电泳,通过BioNumerics(Version3.0)软件进行处理,分析吉林省耐药结核分枝杆菌的DNA多态性。结果共对294株结核分枝杆菌的13个VNTR位点进行了检测,根据这些菌株的指纹多态性特征,主要分成13个型,其中占据主要的前三型分别为Ⅰ型,占81.6%(240/294),二型占2.1%(6/294),三型占1.7%(5/294),由此可以看出本次实验菌株除Ⅰ型以外,其他菌株基本呈散在分布。结论分析表明吉林省结核分枝杆菌以Ⅰ型菌株为主,应加强此型菌株流行的监控及研究。; 王艳华杨修军王博郭建华王春生刘志广辛生; 关键词：结核分枝杆菌基因分型

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