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陈维春: 作品数：34 被引量：70H指数：4; 供职机构：广东医学院衰老研究所更多>>; 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金东莞市科技计划项目更多>>; 相关领域：生物学医药卫生文化科学农业科学更多>>

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重组质粒AHA1的构建和表达及对HeLa细胞周期的影响: 2013年; 目的构建AHA1的真核表达质粒,并在HeLa细胞中进行表达,然后检测过表达的AHA1重组蛋白对HeLa细胞周期的影响。方法提取HeLa细胞中总RNA,逆转录成cDNA后,设计引物扩增AHA1基因的编码序列后构建到pCMV-HA真核表达载体中,转染HeLa细胞后使用HA标签抗体通过免疫印迹检测AHA1融合蛋白在细胞中的表达,最后分别使用流式细胞仪和CCK-8方法检测HeLa细胞的周期和增殖的变化。结果 pCMV-HA-AHA1重组质粒经PCR和DNA限制性内切酶酶切鉴定,最后通过DNA测序并经序列相似性比对,确定AHA1重组质粒构建成功;在HeLa细胞中转染pCMV-HA-AHA1重组质粒后,免疫印迹结果显示AHA1融合蛋白在细胞确已经实现过表达,经流式细胞仪和CCK-8方法检测发现,过表达的AHA1蛋白对HeLa细胞的周期和增殖影响不大。结论成功构建了pCMV-HA-AHA1重组质粒,并且在HeLa细胞成功过表达,且过表达的AHA1蛋白对HeLa细胞的周期和增殖影响不大。; 蒋智文郑慧玲陈维春刘新光; 关键词：HELA细胞免疫印迹法细胞周期

Prelamin A相互作用蛋白Narf的鉴定和表达分析被引量：1: 2011年; 目的:探讨A型核纤层蛋白前体(prelamin A)在细胞内堆积造成细胞早老的机理,筛选了prelamin A相互作用蛋白并研究其在早老细胞中的表达情况。方法:以prelamin A的C末端区域为诱饵蛋白,采用酵母双杂交方法从人骨骼肌cDNA文库中筛选prelamin A相互作用蛋白。构建了prelamin A识别因子(Narf)与绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-Narf,与红色荧光蛋白-prelamin A融合表达质粒pDsRed-PLA共转染HEK293细胞,激光共聚焦显微观察共定位情况。Western blotting检测Narf在衰老表型HEK293PLA细胞的表达情况。结果:筛选得到包括Narf在内的7个候选相互作用蛋白。Narf与prelamin A能相互作用并共定位于核纤层,在prelamin A过表达的HEK293PLA细胞中Narf表达没有升高。结论:Narf在细胞内与prelamin A相互作用,且表达量不受后者影响。; 陈维春刘振杰蒋智文彭琪袁源郑慧玲刘新光; 关键词：酵母双杂交衰老共定位

猪蛔虫缺氧诱导因子在雌雄成虫转录差异性的研究: 2015年; 目的检测雌、雄成虫猪蛔虫缺氧诱导因子转录水平的差异性,探讨猪蛔虫性别差异的分子机制,为蛔虫病的防治提供参考。方法提取猪蛔虫雌、雄成虫总RNA,反转录合成cDNA,以蛔虫actin基因为内参,采用实时荧光定量PCR检测hif-1α和hif-1β基因的转录水平。结果提取的RNA浓度为1.5-2.0μg/μl,A260/A280位于1.9-2.0之间。实时荧光定量PCR显示引物具有良好的溶解曲线和扩增曲线,检测雌成虫hif-1α和hif-1β基因表达的2-△△Ct分别为15.99±3.65和26.26±7.09,雄虫分别为1.02±0.06和1.01±0.05,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论猪蛔虫hif-1α和hif-1β基因转录水平雌成虫高于雄成虫,表明雌虫更能适应宿主体内低氧环境。; 宋杰何庆丰陈维春; 关键词：猪蛔虫缺氧诱导因子定量PCR 转录

杆状病毒AcMNPV vp39基因的克隆、表达与抗体制备被引量：2: 2007年; 目的:构建苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica nucleopolyhedro virus,AcMNPV)VP39的原核表达载体,表达、纯化蛋白并制备多克隆抗体。方法:用PCR方法扩增vp39基因,并将其克隆至pET-21a(+)上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,采用割胶回收的方法纯化融合蛋白,纯化的融合蛋白作为抗原,免疫新西兰大白兔,Western blot检测抗体活性。结果:构建了pET-VP39原核表达质粒,含有该质粒的大肠杆菌经IPTG诱导超量表达了一个与预期理论值相符的约为40kDa的融合蛋白。对制备的抗体进行免疫印迹分析表明该抗血清能与感染苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒的细胞蛋白样品发生特异性反应。结论:获得了兔抗AcMNPV-VP39多克隆抗体,为进一步深入研究VP39在病毒侵染过程中与宿主因子的相互作用提供了检测工具。; 李玲玲李朝飞陈维春庞义; 关键词：苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒原核表达抗体

重组金属硫蛋白2A质粒的构建与表达被引量：2: 2012年; 目的构建重组金属硫蛋白2A(MT-2A)原核表达质粒,并在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,为进一步研究MT-2A奠定基础。方法从人骨骼肌细胞cDNA文库中PCR扩增MT-2A基因DNA序列,构建重组表达质粒MT2A-pET32a,PCR与DNA测序法鉴定插入序列;重组细菌用IPTG诱导表达,His-bind亲和层析柱纯化MT-2A蛋白,Western blotting鉴定蛋白特性。结果扩增获得的MT-2A基因片段长186bp,DNA测序证实MT2A-pET32a重组质粒构建正确;表达的融合蛋白相对分子质量约为29×103,Western blotting证实为目的蛋白。结论成功构建了重组原核表达质粒MT2A-pET32a,在大肠埃希菌内诱导表达并纯化获得MT-2A。; 刘振杰赵树勇周静骆艳婷郑慧玲陈维春熊兴东徐宁刘新光; 关键词：基因表达大肠埃希菌

斜纹夜蛾Cecropin D成熟肽的原核表达及活性检测被引量：5: 2007年; 采用RT-PCR方法从斜纹夜蛾Spodoptera litura脂肪体组织中扩增得到了Cecropin D成熟肽基因序列,分析发现Cecropin D成熟肽与斜纹夜蛾Cecropin B之间存在2个氨基酸残基的差异。将获得的基因序列连接入原核表达载体pGEX-4T-1,并在原核细胞中实现了该蛋白的融合表达。SDS-PAGE结果表明,诱导后的宿主菌比未诱导菌中多出了一条融合蛋白表达带,诱导后1h就可以检测到该蛋白,从诱导后1h到5h该蛋白在表达量上没有明显的差异。生长曲线显示在IPTG诱导后宿主菌的生长受到明显的抑制,纯化后的蛋白对细菌具有一定的抑制作用。; 宋杰陈维春; 关键词：斜纹夜蛾抗菌肽

乙酰转移酶MYST家族的生物学功能被引量：4: 2014年; 组蛋白乙酰化是表观遗传修饰的重要方式,主要受到组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferases,HATs)和组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDACs)催化.MYST是人类HATs的4大家族之一,包括MOF(males absent on the first),TIP60(tat interacting protein 60 kD),结合ORC1的组蛋白乙酰转移酶(histone acetyltransferase binding to ORC1,HBO1),单核细胞白血病锌指蛋白(monocytic leukemia zinc finger protein,MOZ)和MOZ相关蛋白(MOZ related factor,MORF)等,均具有典型的MYST结构域.MYST介导的乙酰化是重要的翻译后修饰,其催化底物包括组蛋白和非组蛋白,如组蛋白H3,H4,H2A,H2A突变体,以及许多参与DNA代谢、细胞增殖和发育调控的蛋白因子.MYST蛋白家族参与许多细胞的生理过程,本文主要综述其在调节基因转录、DNA损伤修复和肿瘤发生发展等方面的生物学功能.; 黄国滨刘新光陈维春; 关键词：组蛋白乙酰转移酶基因转录 DNA损伤修复

如何提高《病原生物学与免疫学实验》课程教学效果被引量：4: 2008年; 宋杰陈维春; 关键词：生物学免疫学课程教学

杆状病毒Splt97和Ac108基因的研究: 最近发现的杆状病毒11k基因家族(InterProdatabaseaccessionnumber：IPR009313)存在于至少16种以鳞翅目昆虫为宿主的杆状病毒中，功能未知。本文选取11k基因家族中的斜纹夜蛾核多角体病...; 陈维春; 关键词：杆状病毒斜纹夜蛾; 文献传递

浅谈多媒体技术辅助医学生物化学教学的体会被引量：5: 2009年; 陈维春宋杰; 关键词：医学生物化学多媒体技术教学

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