佟明华
- 作品数：46 被引量：112H指数：5
- 供职机构：解放军第458医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学轻工技术与工程更多>>
- 人肝再生增强因子cDNA的克隆及其酵母双杂交载体的构建被引量：1
- 2003年
- 目的 :获取人肝再生增强因子 (hALR)阅读框的cDNA及构建其酵母双杂交系统的“诱饵”质粒。方法 :利用RT PCR方法 ,从人胎肝组织中扩增出一约 380bp的DNA片段 ,重组入pGBKT7载体中 ,构建成pGBKT7 hALR ,然后研究此重组质粒在酵母AH10 9中的表达情况并用于筛选人肝cDNA文库。结果 :获得的 378bp的DNA序列与文献报道的人ALR序列一致 ;转化的酵母菌在选择性培养基SD Trp上培养 6 5小时 ,长出约Φ1mm大小的白色菌落 ,而在SD Trp His上不生长 ;酵母提取液的Westernblot分析 ,证实ALR基因在AH10 9以融合蛋白的形式表达 ,并具有免疫活性 ;初步得到hALR相互作用的阳性克隆。结论 :pGBKT7 hALR对宿主菌AH10 9没有毒性作用 ,也没有自身激活报告基因 ,可作为酵母双杂交系统中的“诱饵”质粒。
- 陈思强佟明华孔祥平姚汝华易学瑞潘韵
- 关键词：肝再生增强因子酵母双杂交系统克隆
- 自体骨髓干细胞移植治疗失代偿期肝硬化临床研究
- 目的:探讨自体骨髓干细胞(BMSC)移植对肝硬化失代偿期患者的治疗作用。方法:23例肝硬化失代偿期患者无菌抽取骨髓60～100ml,分离纯化BMSC,然后经肝动脉导管注入肝脏。术后定期检测肝功能,并观察同期的症状体征和不...
- 欧阳石程涛李灼亮刘树人肖必佟明华余宙耀孔祥平
- 关键词：骨髓干细胞肝硬化
- 文献传递
- 复制型HBV转基因小鼠遗传稳定性研究被引量：19
- 2008年
- 目的：提高复制型HBV转基因小鼠的遗传稳定性。方法：应用回交传代及双杂交育种法，经荧光定量PCR、ELISA和化学发光法研究HBV基因在小鼠体内的复制与表达。结果：HBV转基因小鼠已稳定传至第23代，血清HBsAg达4122．31±2044．74IU／ml，93．93％的转基因小鼠血清HBVDNA达10^4-10^4copies／ml，表达复制水平较早期有显著提高并稳定传代；雌雄小鼠之间表达水平无显著性差异。结论：该转基因小鼠经过培育传代，已成为一个高表达且遗传稳定的复制型HBV小鼠模型。
- 孔祥平吴庆洲罗显荣胡莲美李秀梅易学瑞佟明华周军辉刘光泽
- 关键词：稳定性
- Cre重组酶调控的非免疫耐受型OVA-HBsAg转基因小鼠的构建方法
- 本发明公开了一种Cre重组酶调控的非免疫耐受型OVA-HBsAg转基因小鼠的构建方法。本发明首先将酶切线性化后的携带目的基因OVA-HBsAg的表达载体，采用原核显微注射法，靶向性地导入小鼠体内，制备得到Cre重组酶调控...
- 李秀梅刘光泽佟明华易学瑞孔祥平
- 人肝再生增强因子相互作用蛋白基因的克隆
- 2004年
- 目的 :寻找与人肝再生增强因子 (hALR)相互作用的蛋白质 ,探讨其在肝再生过程中的分子生物学机制。方法 :采用酵母双杂交系统 ,以hALR作诱饵蛋白筛选预转化的人肝cDNA文库 ,对阳性克隆进行生物信息学分析。结果 :筛选出 6组与hALR具有特异性相互作用的蛋白基因 ,分别是 :血清白蛋白、金属硫蛋白、Na/K ATPase、硒蛋白P和两个未知功能基因的cDNA序列。结论 :初步克隆了与hALR相互作用蛋白基因 ,为以后深入研究这些蛋白质与hALR之间的相互作用 。
- 佟明华陈思强姚汝华孔祥平
- 关键词：酵母双杂交系统肝再生克隆
- 干细胞及相关因子在肝脏再生中示踪及网络调控研究
- 孔祥平佟明华李快易学瑞聂涛刘光泽龚亮易璐李秀梅陈秀生
- 研究骨髓MSCs、脂肪MSCs、肝卵圆细胞和重编程技术诱导纤维母细胞转分化Mefs细胞作为实验细胞；应用谱系追踪技术研究上述细胞在多种肝损伤模型中多种途径植入后植入细胞的移行、归巢与定居、存活时间及指数、表面标志物的分化...
- 关键词：
- 关键词：肝脏纤维化肝脏损伤
- HIV-2env(gp120)基因在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 1997年
- ＨＩＶ－２Ｅｎｖ蛋白（ｇｐ１２０）是病毒粒子吸附靶细胞膜上ＣＤ４受体的关键蛋白，ｇｐ１２０与ＣＤ４受体结合过程是ＨＩＶ感染机体的第一步。本文应用ＤＮＡ重组技术将ＨＩＶ－２ｅｎｖ（ｇｐ１２０）基因克隆到ｐＥＴ１７ｂ的Ｔ７启动子下游ＥｃｏＲＶ位点，构建成ｐＥＴ１７ｂ－ｇｐ１２０重组质粒，在大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中表达。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果显示在３５０００（Ｍｒ）处有一特异蛋白带，表达量占菌体总蛋白的５．８％。蛋白印迹试验分析此蛋白能与ＨＩＶ－２阳性血清发生特异性反应。ＨＩＶ－２ｅｎｖ基因在大肠杆菌中的表达成功，为ＨＩＶ诊断试剂和疫苗的研究提供有益资料。
- 王秀清金宁一田梅毛春生郭军庆顾万钧佟明华殷震
- 关键词：大肠杆菌基因表达
- 重组人肝再生增强因子的纯化及生物学活性分析被引量：2
- 2006年
- 目的 对在大肠杆菌中表达的重组人肝再生增强因子（rhALR）进行分离纯化及生物学活性分析.方法 以大肠杆菌DH5α发酵表达重组人肝再生增强因子,经包涵体洗涤、变性、目的蛋白复性,以离子交换、分子筛等技术纯化,并进行一系列检定.结果 目的 蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性及柱层析纯化,纯度大于98%,SDS-PAGE测定相对分子质量为30 000,MOLDI-TOF-MS测定其相对分子质量为30 780.522,N-末端15个氨基酸与理论序列一致.Western blot证实rhALR正确表达,等电点5.85～6.85,氨基酸含量与理论值基本符合.动物实验证实rhALR具有明显的促进CCl4毒性肝损伤小鼠肝细胞修复活性.结论 经柱层析纯化的rhALR具有促进小鼠CCl4肝损伤肝细胞修复的活性.
- 李茹冰王治伟傅泳航易学瑞曾平鲁邹清雁佟明华潘韵杨联萍孔祥平
- 关键词：重组人肝再生增强因子层析生物活性
- 肝再生增强因子促进HepG2细胞增殖对细胞Na^+,K^+ATP酶的影响(英文)
- 2006年
- 为了研究rhALR在促进HepG2细胞增殖过程中对细胞Na+,K+ATPase的影响,采用四甲基噻唑盐(MTT)法检验了重组人肝再生增强因子(rhALR)对HepG2细胞的增殖作用并用无机磷比色法测定了细胞Na+,K+ATPase的酶活力。结果显示:rhALR能以浓度依赖的方式促进HepG2的细胞增殖,对细胞Na+,K+ATPase的酶活呈剂量时间依赖型影响;rhALR提高HepG2细胞Na+,K+ATPase的酶活符合MichaelisMenten方程作用机制,Vmax由0.84±0.11μmol·mg-1·min-1上升到1.68±0.07μmol·mg-1·min-1(p<0.01,差异有极显著性),而Km则由23.54±0.12mM变为20.86±0.13mM(p>0.05,差异无显著性),rhALR提高了细胞Na+,K+ATPase的转化效率;Na+,K+ATPase的专一性抑制剂(奎巴因)可以抑制rhALR促进HepG2细胞增殖的作用;ALR能以浓度时间依赖的方式激活细胞的Na+,K+ATPase,ALR引发的细胞增殖与了Na+,K+ATPase的活化有关。该为进一步研究rhALR的生物学功能提供了理论依据。
- 林莹佟明华孔祥平梁世中
- 关键词：酶活
- 重组人心肌营养素对体外培养受损心肌细胞的保护作用被引量：4
- 2007年
- 心肌营养素是一种具有心肌保护功能的细胞因子.为鉴定人心肌营养素在体外具有促进受损大鼠心肌细胞存活的生物学活性,构建pQE-huCT-1表达载体,在大肠杆菌中表达重组人心肌营养素(rhCT-1);利用含有还原型及氧化型谷胱甘肽的复性体系,恢复变性蛋白的天然构象;通过MTT法鉴定rhCT-1的促进受损大鼠心肌细胞存活的生物学活性.pQE-huCT-1在M15菌中得到高效表达,但95%的目的蛋白以包涵体形式存在;通过变性、复性及Ni-NTA纯化,得到纯度为90%的可溶性重组蛋白.利用无血清培养基培养新生大鼠心肌细胞,造成缺血损伤;利用低浓度阿霉素损伤大鼠心肌细胞,构建阿霉素损伤模型;通过加入rhCT-1治疗,发现rhCT-1具有明显的促进受损心肌细胞存活的作用;心肌细胞琥珀酸脱氢酶(SDH)活性随rhCT-1浓度的升高而增强,且呈显著的剂量依赖性关系;通过测定预防组和治疗组心肌细胞SDH和乳酸脱氢酶(LDH)活性,发现预防组较治疗组在促进细胞线粒体产生SDH和降低培养液上清LDH活性方面效果更加显著,说明rhCT-1可能是在心肌细胞损伤早期通过抑制细胞凋亡而达到心肌保护作用的.本研究通过复性获得了可溶性rhCT-1,它在体外具有显著的促进受损心肌细胞存活的生物学活性.
- 刘冠群孔祥平佟明华李茹冰陈文吟游松
- 关键词：心肌营养素-1心肌保护琥珀酸脱氢酶阿霉素
