王强
- 作品数：39 被引量：105H指数：5
- 供职机构：中山大学更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目广东省自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学天文地球农业科学更多>>
- 流感流行及其基因疫苗的研究进展
- 2009年
- 流感的季节性流行和大流行给人类造成了很大的损失。注射流感疫苗是预防流感的主要措施之一。目前上市的人用流感疫苗主要是由鸡胚生产的传统灭活疫苗,在疫苗用毒株的获取和生产速度等方面有很大的局限性。基因疫苗研究在近年来取得了重大进展,显示出了传统疫苗所不能比拟的巨大优势,流感基因疫苗主要有DNA疫苗、腺病毒载体疫苗和痘病毒载体疫苗,本文就这三方面作一简要综述。
- 王红仁王强李刚
- 关键词：流感基因疫苗DNA疫苗
- 一种方便、无PCR过程的DNA shuffling方法被引量：2
- 2004年
- 目前大多数的DNA shuffling方法都需要PCR过程。由于一些限制内切酶的识别位点与切割位点不重叠而产生不同的黏性末端,当再连接的时候,同源片段之间就可以混合起来按照正确顺序组装成新的嵌合体分子。利用这种性质,构建了一种新的、无PCR过程的、简便的shuffling方法。
- 王强刘秋云李刚李宝健
- 关键词：DNASHUFFLING限制性内切酶组织型纤溶酶原激活剂基因重组
- 携带红色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒载体的构建及其体外试验研究
- 2011年
- 目的:采用体外连接技术构建含红色荧光蛋白(RFP)报告基因的重组腺病毒载体,为基因治疗与基因疫苗研究提供重要工具。方法:将pTurboRFP-N上的含RFP基因片段,经酶切连接定向克隆至转移载体pShuttle上,构成重组质粒pShuttle-TurboRFP-N。用I-Ceu I/PI-Sce I双酶切重组质粒pShuttle-TurboRFP-N和骨架质粒pH5'040 pkGFP-Ⅱ,回收目的片段,连接,获得重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N。将其线性化后,经脂质体介导转染至AD293细胞内包装出重组腺病毒颗粒。通过荧光显微镜观察其在AD293细胞内的包装效率和RFP表达情况。扩增并再次感染AD293细胞检测病毒颗粒感染能力,并测定其生物活性及滴度。将所构建的重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N与对照腺病毒载体AdH5.CMV.EGFP在体外感染人肺癌细胞系A549和乳腺癌细胞系MDA-MB-231。通过荧光蛋白RFP和EGFP的表达,比较它们对以上肿瘤细胞的感染效率。结果:经酶切鉴定,证明已正确构建重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N;经AD293细胞包装成具有感染性的病毒颗粒,并能在真核细胞中高效表达目的基因;扩增纯化后获得重组腺病毒颗粒数为3.6×1015vp/L,滴度达1.8×1013pfu/L。重组腺病毒载体AdH5'.040.CMV.RFP-N感染人肺癌细胞系A549和乳腺癌细胞系MDA-MB-231的感染效率,高于对照腺病毒载体AdH5.CMV.EGFP(P<0.05)。结论:成功构建了携带RFP报告基因的重组腺病毒载体,并能够在AD293细胞中高效地表达,对肿瘤细胞的感染效率高。RFP对GFP是一种很好的代替和补充,为基因治疗与基因疫苗研究提供更多的荧光标签。
- 卢建溪阳莉钱师宇王强
- 关键词：腺病毒载体基因重组
- 阿德福韦治疗慢性乙型肝炎过程中HBV DNA及丙氨酸氨基转移酶水平的变化
- 2008年
- 目的研究新药阿德福韦（ADV）治疗慢性乙型肝炎过程中HBV DNA及丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平的变化情况，从而指导临床用药。方法采集16例慢性乙型肝炎（CHB）患者用ADV治疗前血清，即基线（BL）血清，以及持续服药12、16、28．40、48、52、68、80、92周共10个时段的系列血清。用荧光定量PCR法检测其HBV DNA的水平。用全自动生化仪检测其ALT的水平。结果从BL到48周时段，HBV DNA中位数显著下降；在52周，HBV DNA中位数出现反弹；从52至92周时段，HBV DNA中位数再次下降。16例不同时段血清ALT中位数的变化与HBV DNA中位数变化一致。ADV治疗12周时，HBV DNA中位数较基线下降了2．34lg拷贝／ml，无HBV DNA阴转、HBeAg血清学转换；治疗28周时，HBV DNA中位数较基线下降了2．91lg拷贝／ml，有2例HBV DNA阴转、ALT恢复正常、HBeAg血清学转换；治疗40．48周时，HBV DNA中位数较基线分别显著下降了3．83、3．95lg拷贝／ml，有4例HBV DNA阴转、ALT恢复正常、HBeAg血清学转换；治疗52周时。HBV DNA中位数较基线下降了2．90lg拷贝／ml，出现反弹，但仍有4例HBV DNA阴转、ALT恢复正常、HBeAg血清学转换；治疗68、80、92周时，HBV DNA中位数较基线显著下降了3．51、3．81、4．01lg拷贝／ml，分别有4、6、6例HBV DNA阴转、ALT恢复正常、HBeAg血清学转换。16例患者接受ADV治疗的两年中，有9例患者分别从16、28、40周开始HBV DNA的水平显著下降；7例患者HBV DNA的水平下降但不显著。结论阿德福韦治疗慢性乙型肝炎过程中，HBV DNA及ALT中位数的变化情况基本一致。52周时段HBV DNA水平出现反弹。提示52周可能是抗病毒的关键时段。
- 卢建溪王强陈文思谢东英徐启桓陆伟伦李莉朱明芬陈伟李刚
- 关键词：肝炎乙型慢性阿德福韦聚合酶链反应
- 我国恒河猴粪便腺病毒聚合酶基因片段的序列分析
- 2011年
- 目的研究非人灵长类动物猴子腺病毒的分子多样性。方法采集圈养的恒河猴粪便样本,以腺病毒聚合酶基因为目的基因,用PCR方法进行扩增,对PCR阳性产物进行克隆、测序,并进行系统进化分析。结果 57只恒河猴粪便样本有12份存在腺病毒DNA,系统进化分析提示这些序列主要可分为两大组:类SAdV-6组(2个非重复序列)和类SAdV-7组(9个非重复序列)。此外,有3个克隆,其最相似序列分别为:SAdV-1,SAdV-3和HAdV-52。结论研究证实腺病毒在非人灵长类粪便中普遍存在,揭示这些动物肠道内腺病毒的多样性以及系统进化情况。
- 卢建溪钱师宇王强阳莉李刚
- 关键词：恒河猴基因组多样性
- 在67种微生物基因组序列中都不存在的最短的碱基组合
- 2003年
- 对67种微生物基因组全序列进行分析,发现某些碱基组合(及其反向互补序列)在某些基因组中不存在,而这种不存在的概率很低;发现6个11bp的寡核苷酸序列(及其反向互补序列)——AGGGGGGGGTC(GACCCCCCCCT)、AGGGTCCCTAG(CTAGGGACCCT)、ACGTACCTAGG(CCTACGTACGT)、GACACACGTAG(CTACGTGTGTC)、CGCGTAACTAG(CTAGTTACGCG)、CTAGGGACCCA(TGGGTCCCTAG)在这67种基因组中都不存在。上述每个寡核苷酸序列(及其反向互补序列)在由这67种细菌基因组连接而成的DNA分子(长度为169660265bp)中不存在的概率至少小于2.5e-26。
- 王强李宝健
- 关键词：基因组序列微生物DNA分子
- 发现新基因的高效方法——cDNA文库的复性式均一化技术被引量：8
- 2002年
- 由复性式均一化技术制作的均一化cDNA文库 (equalizedcDNAlibrary ,normalizedcDNAlibrary)是近年来发展起来的一种获得EST、发现新基因的高效平台。本文就该技术的原理、方法比较、存在问题和展望进行了阐述。
- 王强刘秋云李宝健
- 关键词：新基因CDNA文库
- 一种腺相关病毒衣壳蛋白基因、相应的蛋白及其应用
- 本发明公开了一种腺相关病毒衣壳蛋白基因、相应的蛋白及其应用。本发明腺相关病毒衣壳蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。本发明腺相关病毒衣壳蛋白所包装的腺...
- 卢建溪王强李刚
- 文献传递
- 广州地区非腹泻人群肠道腺病毒的分子流行病学研究
- 2010年
- 目的研究广州地区非腹泻人群肠道腺病毒的分布特点。方法采集73例成人、41例儿童共114例非腹泻人群的粪便样本,进行体外细胞感染实验,同时提取粪便悬液过滤上清基因组DNA进行巢式PCR扩增,对PCR阳性者进行克隆、测序以及基因型分型。结果 114份样本中,共有12份样本检出腺病毒,阳性率为10.5%(12/114)。其中儿童组阳性率为14.6%(6/41),成人组阳性率为8.2%(6/71),两组间比较差异显著有统计学意义(P<0.05)。经序列分析显示,12份样本分别属于人腺病毒5型(3份)、7型(2份)、12型(3份)及48型(4份)。成人的人腺病毒型别为5型、7型、及48型,婴幼儿的人腺病毒型别为12型、48型。结论广州地区人群粪便样本中检测到人腺病毒5型、7型、12型及48型的存在,其中12型及48型为首次发现,并且12型仅在婴幼儿中发现。此外,文献报道人腺病毒48型为罕见血清型,但其占本研究中阳性样本的33%,其在我国是否属于罕见,需要慎重对待。
- 阳莉卢建溪王强黄建华周才
- 关键词：腺病毒基因型病毒分离流行病学
- 秦岭西段硅质岩地球化学特征及矿物组构分析被引量：2
- 2009年
- 李红中周永章杨志军何俊国马占武安燕飞吕文超王强
- 关键词：硅质岩地球化学特征重结晶作用碳酸盐矿物造山作用石英颗粒
