王洋
- 作品数：28 被引量：34H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院基础医学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 基于荧光强度快速判断蛋白可溶性方法的建立
- 2012年
- 目的:建立一种通过观察荧光强度,快速、直观地判断蛋白可溶性的方法。方法:选择抗辐射蛋白CBL502-AA及其突变体CBL502-ΔAA′作为目的蛋白,增强型绿色荧光蛋白作为报告分子,分别构建融合蛋白表达载体;通过SDS-PAGE和荧光观察两种手段检测和比较融合蛋白的可溶性。结果:荧光观察融合蛋白的可溶性与SDS-PAGE检测结果一致。结论:建立了一种基于荧光强度,快速、简单、直观的比较蛋白可溶性的方法。
- 肖丽霞叶丙雨王洋师明磊何彰华张乐之赵玉军赵志虎
- 关键词：荧光绿色荧光蛋白
- 含有分裂型内含肽DnaE基因的表达盒设计、合成及高效表达载体的构建被引量：1
- 2010年
- 目的:建立一种简便、快捷的基因从头设计、优化与合成策略,进行含有分裂型内含肽DnaE基因的表达盒全合成并构建高效表达载体。方法:以免费软件GeneDesign 3.0为主要平台,同时结合Tandem Repeats Finder、UNAFold等不同生物信息学软件,对含有DnaE基因、合适酶切位点的表达盒进行设计与分段合成;合成寡核苷酸片段通过重叠PCR进行组装与克隆。结果:利用建立的设计流程,合成了大小为44～64 nt的14段寡核苷酸片段,通过重叠PCR,实现了14段寡核苷酸片段的一次性组装,经过克隆、酶切鉴定、序列分析得到了序列完全正确的表达载体。结论:建立了一套有效的、基于免费软件的基因从头设计与合成的策略,构建了可以用于环肽小分子文库表达与筛选的表达载体。
- 赵珺王洋师明磊王东田靖耿排力赵志虎
- 关键词：生物信息学
- 辛二酰苯胺异羟肟酸诱导人卵巢癌细胞OC3自噬作用被引量：2
- 2015年
- 目的探讨辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)是否诱导人卵巢癌细胞OC3发生自噬。方法 SAHA0.05,0.25,1.25,6.25和31.25μmol·L-1处理OC3细胞24 h后,倒置显微镜吉姆萨和-瑞氏染色观察细胞形态变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活;流式细胞术检测自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3B)的表达;AO/EB双染色观察红色酸性自噬囊泡的出现;电镜直接观察自噬囊泡的结构。结果不同浓度SAHA处理后,OC3细胞形态呈不规则梭形或多角形,细胞空泡化增多,折光性差。MTT结果表明,不同浓度SAHA处理对OC3细胞的存活具有明显的抑制作用,并存在时间和浓度效应关系,浓度相关系数分别为r12 h=0.898,r24 h=0.976和r48 h=0.952(P<0.05),SAHA 0.05,0.25,1.25,6.25和31.25μmol·L-1时,时间相关系数分别为0.999,0.654,0.999,0.869和0.922(P<0.05)。SAHA与OC3细胞作用24 h后,AO/EB双染色可见红色酸性自噬囊泡出现;进一步电镜观察,可观察到自噬囊泡结构;流式细胞术检测结果表明,与正常对照组相比,SAHA 0.05,0.25,1.25,6.25和31.25μmol·L-1处理OC3细胞24 h后,LC3B阳性细胞比率显著升高,分别为(19.4±2.4)%,(28.5±3.4)%,(34.6±3.9)%,(38.6±3.2)%和(61.8±1.0)%(P<0.05)。结论SAHA可能通过诱导人卵巢癌细胞OC3发生自噬而杀伤肿瘤细胞。
- 赵岳刘朝晖张思刘元林周向东王洋童英张毅
- 关键词：卵巢肿瘤自噬
- 肿瘤转移抑制基因1及Gli1基因在子宫内膜腺癌细胞系中的表达被引量：3
- 2016年
- 目的探讨肿瘤转移抑制基因1(metastasis suppressor 1,MTSS1)及Gli1基因在子宫内膜腺癌细胞系Ishikawa和HEC-1A中的m RNA的转录及蛋白表达水平。方法体外培养子宫内膜高分化腺癌细胞系Ishikawa和中分化腺癌细胞系HEC-1A细胞,采用RT-PCR和Western blot法分别检测两株癌细胞系中MTSS1和Gli1基因m RNA的转录及蛋白的表达水平。结果子宫内膜高分化腺癌细胞系Ishikawa中MTSS1基因m RNA的转录及蛋白的表达水平显著高于中分化细胞系HEC-1A(P<0.05),Ishikawa细胞系中Gli1基因m RNA转录及蛋白表达水平显著低于HEC-1A细胞系(P<0.05)。结论 MTSS1可能作为转移抑制基因,通过调控Sonic hedgehog(Shh)信号通路参与子宫内膜腺癌的发生发展,为进一步研究子宫内膜腺癌的发生发展机制奠定了基础。
- 周向东李雪马彦张萍萍张思刘元林王洋童英张毅
- 关键词：子宫内膜腺癌ISHIKAWA细胞
- 对DNA片段进行3’末端生物素标记的方法
- 本发明公开了一种对超声破碎得到的DNA片段进行3’末端生物素标记的方法。本发明提供的方法：甲：采用Klenow片段和/或T4DNA聚合酶对DNA片段进行处理的同时加入生物素标记的dCTP，随后补平；乙：采用Klenow片...
- 师明磊赵志虎王东王洋
- 文献传递
- 应用Red重组技术构建四环素抗性多基因串联表达载体被引量：1
- 2011年
- 目的构建一种四环素抗性的多基因串联表达载体。方法设计同源臂引物,通过重叠延伸PCR获取含四环素抗性基因的打靶序列,应用pKD46介导的Red重组系统,在DH5α内替换多基因串联表达载体pET-m28a(+)中的抗性基因序列;再利用同尾酶(isocaudarner)策略,将sfp和accA1两基因串联组合于pET-mt28a(+)中,并进行共表达鉴定。结果获得了含四环素抗性的重组质粒pET-mt28a(+);构建了两基因串联重组质粒pET/sfp/accA1-mt28a(+),且两基因能够在同一载体上协同表达。结论成功构建了一种四环素抗性表达载体pET-mt28a(+),并可介导多基因的协同表达,为红霉素合成通路在大肠杆菌中的重建奠定了基础。
- 何彰华师明磊王洋叶丙雨黄芬张彦范秋声王东肖丽霞张乐之李德彬闫兴赵志虎
- 关键词：RED重组质粒红霉素
- 毕赤酵母醇氧化酶1启动子突变体的分离与鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的:通过醇氧化酶1启动子突变,筛选毕赤酵母高水平表达菌株。方法:通过致错PCR构建醇氧化酶1启动子突变体,经酶切连接到改造过的质粒HSA-pPIC9上,转化毕赤酵母GS115感受态细胞,摇瓶培养表达筛选人血清白蛋白(HSA)高表达突变体菌株。结果:克隆测序结果表明,突变的醇氧化酶1启动子-910和-569位点处共2个碱基发生了T→C突变;获得一株高表达菌株,摇瓶中HSA的表达量由200 mg/L提高到335 mg/L。结论:通过醇氧化酶1启动子突变成功构建了HSA高表达菌株。
- 熊向华赵洪亮薛冲王洋陈惠鹏刘志敏
- 关键词：毕赤酵母人血清白蛋白
- 预防和治疗辐射损伤的蛋白CAA′及其应用
- 本发明公开了一种预防和治疗辐射损伤的蛋白CAA′及其应用。本发明提供了一种环化蛋白(命名为蛋白CAA′)，是如下(a1)或(a2)或(a3)或(a4)：(a1)序列7自N末端第11至305位氨基酸残基组成的环化蛋白；(a...
- 赵志虎叶丙雨王洋沈文龙师明磊张彦何彰华王政
- 文献传递
- 一种HCV蛋白酶抑制剂筛选模型
- 本发明公开了一种HCV蛋白酶抑制剂筛选模型。本发明提供了融合蛋白(a)或(b)：(a)自N端至C端依次含E173N片段、特异多肽片段和E173C片段；(b)自N端至C端依次含E173N片段、特异多肽片段、E173C片段、...
- 赵志虎师明磊陈娜闫兴王洋张彦
- 文献传递
- CTCF是一种细胞类型特异性表达的核内定位蛋白因子被引量：2
- 2012年
- 目的探讨CCCTC结合因子（CCCTC—binding factor，CTCF）在细胞核内的定位以及该基因表达水平的细胞类型特异性。方法通过蛋白质印迹技术对乳腺癌细胞MCF-7的不同细胞组分中CTCF蛋白的含量进行了分析；应用蛋白质免疫荧光技术，通过共聚焦显微镜分析系统对CTCF在MCF-7单细胞中的定位进行了分析；然后通过蛋白质印迹技术和RT—qPCR技术分别对CTCF在正常外周血白细胞、MCF-7以及淋巴瘤细胞Jurkat和Ramos等不同类型细胞中的表达水平进行了分析。结果蛋白质印迹和蛋白质免疫荧光技术的分析结果表明CTCF主要分布在细胞核内。蛋白质印迹和RT—qPCR技术的分析结果表明CTCF在这些不同细胞类型中的表达水平各不相同，与正常细胞相比较，CTCF在肿瘤细胞中的表达水平明显增高；在不同类型的肿瘤细胞中的表达水平也存在着很大的差异性。结论CTCF是一种细胞核内特异定位的蛋白因子，CTCF的表达水平具有细胞类型特异性。
- 任立成王洋师明磊马骊杨忠王小宁赵志虎
- 关键词：免疫荧光
